Bài giảng : CÁC QUÁ TRÌNH TÁCH TRONG SẮC KÝ LỎNG part 2 doc

Ưu đi ểm của HPLC • Đi ều kiện phân tích khá dễ dàng : - Không c ần bay hơi mẫu như GC, do đó phân tích được các ch ất kém bên nhiệt... S ắc ký pha thuận thường Normal Phase Mode Là ngư

m i x e d sample

Quá trình tách

Mobile phase

Ưu đi ểm của HPLC

• Đi ều kiện phân tích khá dễ dàng :

- Không c ần bay hơi mẫu như GC, do đó phân tích được

các ch ất kém bên nhiệt.

• D ễ dàng thu hồi chất phân tích với độ tinh khiết cao n ếu gắn bộ thu hồi phân đoạn (fraction

collector) , thư ờng dùng trong điều chế, tách

tinh d ầu, dược phẩm …

• Đ ộ lặp lại cao

• Thư ờng không phân hủy mẫu

S ắc ký pha thuận (thường)

Normal Phase Mode

Là ngư ời đầu tiên phát triển phương

pháp s ắc ký, sử dụng để tách

Chlorophylls

Ber Deut Botan Ges., 24, 384 (1906)

Adsorptionsanalyse und

chromatographische

Normal Phase

Petroleum ether

CaCO 3

Chlorophyll's

Color

Normal Phase

• Trong h ệ thống sắc ký đầu tiên người

ta s ử dụng

– CaCO3 làm ch ất nhồi cột (pha tĩnh)

– Petroleum ether làm dung môi pha đ ộng

• Và t ừ đó pha thuận được định nghĩa

như sau :

Normal Phase

C ộ t : mang tính phân c ự c

Các lo ại cột HPLC pha thuận

• C ột Silica gel : dùng đa mục đích (general

use)

• C ột Cyano : dùng đa m ục đích (general

use)

• C ột Amino : phân tích đư ờng

• C ột Diol : phân tích protein

Silica gel

Si

Si

-Si-CH 2 CH 2 CH 2 CN

-Si-CH 2 CH 2 CH 2 NH 2

-Si-CH 2 CH 2 CH 2 OCH (OH) -CH 2 (OH)

Sillica gel bi ến tính (bổ trợ)

Các liên k ết xảy ra thế nào?

Hydrogen bonding

Non-polar

Hydrogen bonding : Liên k ết

hydrogen

‹ N ếu chất phân tích có

‹ N ếu mãu có nhóm tert-butyl hoặc các nhóm

không phân c ực lớn

Retention Time và liên k ết

Hydrogen

OH

HO SiOH

SiOH

Mạnh

Yếu

or

Rất yếu

1

1

2

• Dung môi chủ yếu (không phân cực) :

– Hydrocarbons (Pentane, Hexane, Heptane, Octane)

– Aromatic Hydrocarbons (Benzene, Toluene, Xylene)

– Methylene chloride

– Chloroform

– Carbon tetrachloride

• Dung môi phụ (phân cực hoặc hơi phân cực) :

– Methyl-t-butyl ether (MTBE), Diethyl ether, Tetrahydrofuran (THF),

Dioxane, Pyridine, Ethyl acetate, Acetonitrile, Acetone, 2-propaol, ethanol, methanol

• Dung môi ch ủ yếu được sử dụng chính làm pha động, dung

môi ph ụ thường được thêm vào với tỉ lệ nhất định để thay

đ ổi thời gian lưu.

• Các dung môi thư ờng không hấp thu trong vùng UV để dễ

dàng cho vi ệc xác định.