Bài giảng : CÁC QUÁ TRÌNH TÁCH TRONG SẮC KÝ LỎNG part 5 ppsx

¾GFC Gel Filtration Chromatography : s ắc ký tinh lọc gel, thường sử dụng trong l ĩnh vực sinh hóa... M ối tương quan giữa trọng lượng phân t ử MW và thời gian lưu RT Gi ới hạn loại tr

S ắc ký ion : Ion Exchange

N +

R

R R

Sample

SO 3 - + Sample

+

+

+ +

+ +

+

+

+ + +

+

L ực ion

Ion Exchange

• S ử dụng trong lĩnh vực sinh học

(phân tích protein, peptide, amino acid)

• S ắc ký Ion : phân tích các hợp chất ion

Bao g ồm 2 loại cột:

– C ột trao đổi Cation

• Strong Cation Exchange (SCX) (R-SO3- )

• Weak Cation Exchange (WCX) (R-COO - )

– C ột trao đổi Anion

• Strong Anion Exchange (SAX) (R4N + )

• Weak Anion Exchange (WAX) (DEAE – diethyl aminoethyl)

Phân tích Protein s ử dụng cột WCX

‹Analytical Conditions

™Column : Shim-pack WCX-1

™Mobile phase : [A] 20 mM phosphate buffer (pH=6.0) [B] A+0.25M sodium sulfate

[A] - [B] 30 min linear gradient

™Flow rate : 1.0 mL/min

™Temperature : ambient

™Detector : UV-280 nm

™Injection volume : 10 uL

‹Peaks

1 albumin

2 myoglobin

3 α-chymotrypsinogen A

4 liponuclease A

5 lisozyme

Nh ững điểm quan trọng cần lưu

ý trong s ắc ký ion

• pH c ủa dung dịch đệm

• N ồng độ của dung dịch đệm

• Phương pháp r ửa giải

– Đ ẳng dòng : Isocratic

– Gradient pH

– Gradient l ực ion

S ắc ký gel SEC

• S ắ c gel (s ắ c ký size phân t ử ) (SEC)

thư ờ ng đư ợ c bi ế t dư ớ i tên :

¾GPC (Gel Permeation

chromatography) : s ắc ký thẩm thấu gel, thư ờng sử dụng trong lĩnh vực polymer.

¾GFC (Gel Filtration Chromatography) :

s ắc ký tinh lọc gel, thường sử dụng

trong l ĩnh vực sinh hóa.

Nguyên lý c ủa SEC

• Không s ử d ụ ng hi ệ u ứ ng tương tác

• Tách d ự a trên s ự khác nhau v ề th ờ i gian di chuy ể n c ủ a ch ấ t.

Th ứ tự rửa giải

SEC

Column

M ục đích của GPC / GFC

• GPC

– S ử d ụ ng đ ể xác đ ị nh tr ọ ng lư ợ ng

phân t ử c ủ a polymer.

• GFC

– Tách các protein

M ối tương quan giữa trọng lượng phân t ử (MW) và thời gian lưu RT

Gi ới hạn loại trừ

Gi ới hạn thẩm thấu

Time

L ập đường chuẩn

• Tiêm t ừng dung dịch chuẩn polymer có

phân t ử lượng khác nhau để biết được mối quan h ệ giữa tr ọng lượng phân tử và thời gian lưu

No time(min) mol wet.

1 22.0 5500000

2 22.6 1800000

3 23.4 860000

4 25.0 400000

5 27.4 160000

6 31.0 50000

7 33.8 20000

8 38.4 4000

9 39.8 2000

10 42.8 600