Bài giảng : CÁC QUÁ TRÌNH TÁCH TRONG SẮC KÝ LỎNG part 6 doc

Cách l ựa chọn loại sắc kýLo ại sắc ký Dung môi s ử dụng Ch ất phân tích Reverse Phase H2O/Buffer, ACN, Các chất trung hòa hoặc MeOH không ion hóa, tan trong hỗn hợp nước/dung môi hữu cơ

Tiêm m ẫu thật

GPC

Tách Protein s ử dụng cột GFC

‹Analytical Conditions

™Column : Asahipak GFA-50

™Mobile phase : 0.1 M sodium phosphate 0.1 M NaCl (pH=7.0)

™Flow rate : 0.5 mL/min

™Temperature : ambient

™Detector : UV-280 nm

™Injection volume : 10 uL

‹Peaks

1 glutamate dehydrogenase

2 lactate dehydrogenase

3 enolase

4 adenylate kinase

5 cytochrome C

S ắc ký tách đồng phân quang học

C*

H

COOH

NH 2

NH 2

R

H

Mirror

Tính ch ất vật lý của các chất này giống hệt

* Chiral Center

Tách các đ ồng phân quang học

– cách 1

(L) + (R) (L) -(R) (R) + (R) (R)-(R)

Các s ả n ph ẩ m t ạ o thành có th ể tách b ằ ng

S ắ c ký pha thu ậ n ho ặ c pha đ ả o

• Tách tr ực tiếp sử dụng cột Chiral

(R)

(R) Tương tác m (L) ạnh

Tương tác y ếu

Tách các đ ồng phân quang học

– cách 2

Cách l ựa chọn loại sắc ký

Lo ại sắc ký Dung môi s ử dụng Ch ất phân tích

Reverse Phase H2O/Buffer, ACN, Các chất trung hòa hoặc

MeOH không ion hóa, tan trong

hỗn hợp nước/dung môi hữu cơ

Ion-Pair RP Giống RP nhưng Các chất dạng ion hoặc có thể

thêm chất tạo cặp ion ion hóa

Normal Phase Hexane, CH2Cl2 Hỗn hợp các chất không tan

trong hỗn hợp dung môi hữu

cơ – nước

Ion Exchange H2O/Đệm Các ion vô cơ, protein, axit

nucleic

Cách l ựa chọn loại sắc ký

h ữu cơ – nước

Các cách r ửa giải trong HPLC

Time

Time

Isocratic

Các cách r ửa giải trong HPLC

Th ờ i gian phân tích dài

Kh ả năng tách kém

MeOH / H 2 O = 6 / 4

MeOH / H 2 O = 8 / 2