Trong đó, cây cỏ sữa lá lớn hiện diện khắp nơi và được sử đụng trong Y học cô truyền dé chữa các bệnh thông dung như: giái nhiệt, hạ sốt.. Cho đến nay việc nghiên cứu về thành phân hóa h
Trang 1BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH
KHOA HÓA HỌC
xݣ42cs
KHÓA LUẬN TOT NGHIỆP
CƯ NHÂN HÓA HỌC
Chuyên ngành Hóa Hữu cơ
EUPHORBIA HIRTA L.
Ho thau dau (Euphorbiaceae)
Hướng dẫn khoa hoc: Th.S Lê Thị Thu Hương
Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
Niên khóa: 2010-2014
THU VIERx
Tp Hồ Chi Minh, tháng 5 năm 2014
Trang 2Ý KIÊN CUA HOI DONG
Stnhưưên đã sửa tá Auctn
Trang 3LỜI CẢM ƠN
Luận văn được thực hiện tại phòng hóa hữu cơ thuộc khoa Hóa trường đại học
Sư Phạm thanh pho Hỗ Chí Minh
Với tắm lòng tran trọng va biết ơn sâu sắc em xin chan thành cắm ơn cô Lẻ Thi
Thu Hương người cô luôn hết long, tận tỉnh hướng dan, giúp đỡ tạo mọi điêu kiện thuận
lợi giúp em hoản thành tốt khỏa luận này Nếu như không có sự chỉ bảo tận tinh của cô
tử việc thu thập mẫu, tìm tư liệu vả trong quá trinh thực nghiệm luôn được cỏ động viên
chang em thi dé tai đã không được hoản thành như ngày hom nay
Em xin cam ơn cô Nguyễn Thị Ánh Tuyết, thay Bùi Xuân Hao, thay Dương Thúc
Huy đã giúp dd và cho chúng em những ý kiên quý báu dé em hoàn thành dé tai của
minh.
Em xin cảm ơn các bạn phòng thí nghiệm hóa hữu cơ trường đại học Sư Phạm
thánh pho Ho Chi Minh đã quan tâm nhiệt tinh hưởng dẫn vả tạo mọi điều kiện giúp đờ
em trong suốt quá trình thực hiện đẻ tải
Tôi xin gửi lời cảm ơn đến đến tat cá bạn bẻ tôi, đã luôn bên tôi giúp đờ vả động
viên tôi hoàn thành khóa luận này.
Em rat mong nhận được sự góp ý của thầy cô vả các bạn đẻ tải này được hoànchỉnh hơn,
Trang 4DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TÁT
Mũi ba
Mũi rộng Mũi đa
Độ dich chuyển hoá học
Hằng số ghép spin
Một phần một triệuSắc ký bản móng
Ete đâu hỏa
Trang 5DANH MỤC CAC BANG
Bảng 2.1 Sắc kí cột silica gel cao ethyl aC€tait€ 2-9555 5221212242221105322ce6 ló
Bảng 3:9 Sắc kí cột phân đoạn KÃ:Í: csác <2: 25CSc 02-602 S0 02005020 0X66 17
Bang 2.3 Sắc kí cột phân đoạn EA.2 c.siesssccvvsseseeercsesoneecsasseseesnsgseeceansencosnssecssninsseeeseey 18
Finer 98 S6§fEN rähfg GA EA/PT, o o «sec ovwves) peepee paonnean recnaes 18
Bảng 2.5 Sắc kí cột phân đoạn BA.2.04 oo ccccecsitessestueccsnsssesesssesnescssecssess 19
Bang 3.1: Số liệu phỏ "C-NMR của hợp chat EHI va hợp chat so sanh - 25
Bang 3 2: Số liệu phé "C-NMR của hợp chất EH3 va hợp chat so sánh 28
DANH MỤC CÁC SƠ ĐỎ
Sơ dé 2.1 Qui trình điều chế cao ether đầu hoá (ED) và ethyl acetate (EA) 20
Sơ đỏ 2.2 Qui trình cô lập hợp chat EHI từ cao ethyl acetate - 5-5552 21
Sơ đỏ 2.3 Qui trình cô lập hợp chat hữu cơ EH3 từ cao ethyl acetate 22
Trang 6TPS | TON 1
CGHƯƠNGUTÔNG QUAN ec PC RCE PRM WD aN EEOC IES 2
1.1.DAC DIEM THUC VAT CAY CO SUA LA LONI see 3
133 Hoạt tính chông ung thd!) ö0E0NSS016050885)940877520030/301400088110% Tớ 5
MOT SO DON THUOC DAN GIAN CO VỊ CO SUA LA LONMA8 5
1.3.CAC NGHIÊN CUU VE THÀNH PHAN HOA HỌC 5
CHUGNG 2: THUC NGHIEM se
2.1 NGUYEN LIEU, HOA CHAT, THIET BỊ -( SSS.cceeree iS
223 Sắc kỷ cốt phân đoạn EA.2 sab Ee ee TTS
224, Sắc tỷ cội phân đoạn EAÁ2T /8
225, Sắc kỷ cốt phan đoạn EA.2 l4 SiN ERA: VOR NTA
2.26 Sắc kỷ cột phân đoạn EA.2314! eo
CHUONGS ILE UA VA TERA LUẬN Si 23
Trang 73.1 KHAO SÁT CÁU TRÚC HÓA HOC CUA HỢP CHAT EHI 24
3.2.KHAO SAT CÁU TRÚC HOA HỌC CUA HỢP CHAT EH3 36CHƯƠNG 4: KET LUẬN VA ĐỀ XUẮTT 5s<ccsssssssssesssssosessossoosos 29
ASU ARIST LUẬN Gác cac cuoi tsgttcci0g0102030302666)G2230)0GãG000002653/064/0-2A610 30
LEE SS 1 oT 31
TAL LIỆU THAM KHẢ Q iii eas 32
TAP BBO TIER VET sedeeeeeieieraseessotetairdedoaseeseaoseesaseSE
OL (ae 32
NÑỮ@MINTERNEELx:L-SLkGeteGiceidiiooisáeuvscaeexeegiset 34
Trang 8Khóa luận tot nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
LOI MO DAU
lir xưa đến nay việc sử dung các cây có lâm thuốc quý đóng vai trò hết sức quan trọng trong đời sông con người Ngày nay với nén kính tế phát triển mạnh mẽ mục
tiêu châm sóc sức khỏe con người ngảy cảng được dé cao chính vì thể, được tính va hỏa
tỉnh của nhiều loại thảo mộc đang được nghiên cứu vả không ngừng phát triển.
Trong đó, cây cỏ sữa lá lớn hiện diện khắp nơi và được sử đụng trong Y học
cô truyền dé chữa các bệnh thông dung như: giái nhiệt, hạ sốt an than, kháng viêm, chữa
ly hen suyén, viêm phé quản Ngoài ra, cò sữa lá lớn còn chứa chat chong oxy hóa.
kháng khuản khang nam lợi tiểu va chống ung thw
Cho đến nay việc nghiên cứu về thành phân hóa học của cây cỏ sữa lá lớn ở
nước ngoải nói chung rat phô biển đặc biệt ở các nước như Trung Quốc Nhật Ban, An
Độ Malaysia nhưng & Việt Nam có rat ít công trình nghiên cứu vẻ loại cây nay
Với những lí do trên, chúng tôi đã chọn đẻ tai “Khảo sát thành phan hóa
học của cây cỏ sữa lá lớn - Euphorbia hirta L.” nhằm mục dich góp một phan nhỏ
vào việc tình hiểu thành phản hóa học trong cây có sữa lá lớn được thu hái ở tính Đồng
Nai
Trang |
Trang 9Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
CHUONG 1:
TONG QUAN
Trang 10Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hanh
1.1 ĐẶC DIEM THỰC VAT CÂY COSTA LA LON! 334
Hình 1.1: Cây có sữa lá lớn Hình 1.2: Hoa và quả
I.I.I Mô tả chung!!**
Cỏ sữa lá lớn là cây thảo sông hằng năm hay nhiều năm, có thân mảnh cao 15-40
cm, toàn cây có lông rap màu vang nhạt va có nhựa mủ trắng.
Lá mọc đối, cuồng ngắn, phiến lá hinh mũi mac, dai 2-3 cm, rộng 5-15 mm, mép
có răng cưa nhỏ Gốc cuống lá cỏ 2 lá kèm nhỏ hình lông cứng Nhiéu cụm hoa hình chén nho ở các nách lá Mỗi chén mang các hoa đơn tính
Qua rất nhỏ, đường kinh khoảng 1,5 mm, khí giả nứt thành 3 mảnh vò mang 3
hạt rất nhỏ
1.12 Vieng phân bố, thu hai’?!
Có sữa lá lớn có nguồn gốc châu Mỹ nhiệt đới Hiển nay, cây moe phô biến
không chi ở những vùng nhiệt đới ma ngay cả vùng á nhiệt đới, châu Phi, châu A
va châu Uc như Trung Quốc, An Độ, Malaysia, Australia
© nước ta, cây có sửa lá lớn mọc hoang ở khắp mọi nơi, nhật là những nơi nhiều sói đá, dé đảng tìm được ở bờ bụi, ven đường
Trang 3
Trang 11Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
1.2 CÁC NGHIÊN CUU VE DƯỢC TÍNH
Ở Việt Nam cây cỏ sữa lá lớn là một trong những cây thuốc dân gian quen thuộc
dùng dé trị kiết ly, ly trực khuản ly amib, viêm ruột cấp khó tiêu
Dùng cây có sữa lá lớn dé chữa các bệnh ngoài da như eczema, viêm da hac lào,
zona, viêm mủ da ngoài ra còn dùng cho phụ nữ sinh đẻ it sữa hoặc tắc tia sữa 9" Hiện nay ở Việt Nam cao nước cỏ sữa lá lớn được phôi hợp với cây hoảng đẳng
dé chữa bệnh ly mang tên Codanzit Í!Ì.
Nhiều nghiên cứu chỉ ra rằng Euphorbia hirta L chứa nhiêu chất trị rỗi loạn tiêu
hóa tiêu chay!"!_ loét da day ợ nóng nôn mira Í5Ì, bệnh ty", bệnh cao huyết áp
Ml chống ngứa, thông sữa, rồi loạn kinh nguyệt vô sinh!*!, cây cũng được sử dụng
trong điều trị các rồi loạn phé quản và đường hô hắp bao gồm cả bệnh hen suyễn
(71, viêm phẻ quản, sốt mùa hé Í*!! và viêm kết mạc!'?1,
Có sữa lá lớn có các hoạt tính chống oxy hóa, kháng khudn!*!, kháng nắm, lợi
tiểu!5!, giải lo âu, chống viêm và chéng ung thưi92%) ,
Ngoài ra người ta còn nghiên cứu tác dụng của có sữa lá lớn trong việc điều trị
bệnh tiêu đường |".
1.2.1 Hoạt tính khang viêm?!
Năm 1991, khi khảo sát chiết xuất n-hexane của các bộ phận của cấy cỏ sữa lá
lớn và thành phân chính của nó (triterpene, đ-amyrin, 24-methylenecycloartenol,
-sitosterol) M.C Lanhaers va các cộng sự đã đánh giá hiệu qua kháng viêm ở
chuột Chiết xuất dung dịch nước đông khô có khả năng giảm dau, hạ sốt và chéng
viêm ở chuột Bên cạnh đó, hoạt động tram cảm trung ương, thé hiện bởi tác dụng
an than mạnh mẽ kết hợp với hiệu ứng giải lo âu, cũng được tiên hành nghiên cứu.
1.2.2 Hoạt tính kháng khuẩn?“
Năm 1995, bang cách sử dung các đòng tế bảo Vero K Vijaaya, S Ananthan
va các cộng sự đã nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của các hợp chất chiết xuất từ
Camellia sinensis L và chiết xuất methanol của có sữa lá lớn chống lại bệnh ly
-một loại hệnh do Shigella spp gây nén, Các tác dụng kháng khuẩn của dịch chiét
methanol của có sữa lá lớn đã được chứng minh trong phòng thí nghiệm bằng cách
Ƒ—]————TTTT——ễ—E FE‡T——è———_ k k Ƒ—————————
Trang 4
Trang 12Khóa luận tat nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
sử dụng loài vi khuan Shigella, Thực nghiệm cho thấy chiết xuất không gây độc tế
bảo và và có hoạt tính kháng khuẩn
1.2.3 Hoạt tính chẳng ung thu!”
Cũng năm 1995, K Vijaya S Ananthan và các cộng sự còn nghiên cứu kha
năng gây độc của các chất trong các dịch trích khác nhau Các chất chiết xuất nayđóng vai trò như một tác nhân kháng khuân hiệu quả và không gây độc tế bảo
Riêng chiết xuất của cỏ sữa lá lớn lại có hoạt tính gây độc tế bao chọn lọc doi với
một số dòng tế bảo ung thư Điều đó cho thay cây cỏ sữa lá lớn rất hữu ích trong
điều trị ung thư, khỏi u ác tính đặc biệt ác tính và ung thư tế bảo vảy
MOT SO DON THUỐC DAN GIAN CÓ VỊ CO SUA LA LON!!!
Cầm tiêu chảy: Lay khoảng 12 gam thân lá co sữa lá lớn nghiên hoặc xay chung
với it nước uống vao sẽ giúp cảm tiêu chảy va ly.
Chữa các bệnh nhiễm tring da: Lay cây cỏ sữa lá lớn phơi khô nghiên thanh
bột trộn thành khối nhão sau đó đắp lên vết thương hay vết bong.
Chữa ly: Cỏ sữa lá lớn phối hợp với hoàng đẳng, nau thành cao lỏng dé uống
Chữa ho hen: Cỏ sữa lá lớn 10 g lá cây bông bồng 3 lá, lá dau 20 g Sắc uốngngày một thang chia 2-3 lần
Chữa thiếu sữa: Có sữa tươi 100g, hạt cây gạo 40g, hai thứ sắc kỹ, dy nước nấu cháo gạo ăn.
CÁC NGHIÊN CỨU VE THÀNH PHAN HOA HỌC
Nam 1966, D R Gupta và S K Gargl!?Ì khảo sat trên cao eter dầu hóa vả cao alcolcủa thân va lá có sữa lá lớn, đã cô lập được cấu tử taraxerol (1) friedelin (2) va &
sitosterol (3).
Nam 1972, Ahmed M Atallad va Harold J Nicholas!" đã cô lập từ lá va thân có sữa
lá lớn được các cầu tử: taraxerol (1) taraxerone (4) campesterol (5) va stigmasterol
(6).
Trang 13Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
—_—_—_——»——————
Năm 1978 L Elnaggar va các cộng syt'*! đã cô lập được từ cao alcol của cỏ sữa lá
lớn 2 chất có hoạt tính trị liệu là acid shikimic (7) và choline (8)
Nam 1980, tir phan thân của có sữa lá lớn R, K Baslas, R Agarwail®*! đã cỏ lập được cycloartenol (9) và cuphorbol (10).
Năm 1991, L Chen đã cô lập được các hợp chat từ lá cúa có sữa lá lớn!'”Ì 6 hợp chat
Năm 2012, Wu Yi Qu Wei, Geng Di, Liang Jing-Yu, Luo Yang-Li đã cô lập từ cao ethanol
của cay có sữa lá lớn các hợp chất sau!*"!:
Trang 14Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
Vv 3-Hydroxyoctanoic acid O-£-D-glucopyranoside (35)
> Methyl 3-hydroxyoctanoate O-2-D-glucopyranoside (36)
Methy! 3.Š-đimethoxy-4-hydroxyphenylpropanoate O-f-D-glucopyranoside
7 Methyl! £-D-glucopyranosy! tuberonate (S0)
Năm 2013 Consolacion Y Ragasa Kimberly B Comelio đã cô lap":
Eee
Trang 7
Trang 15Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
» Cycloartenol fatty acid ester (56)
>» Lupeol fatty acid ester (57)
> #amyrin fatty acid ester (59) (R = gốc acid béo mạch dai)
*Công thức cầu tao của các hợp chất từ (1) đến (59):
Trang 16Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
Trang 17Khóa luận tốt nghỉ Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
Trang 18Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
Trang 19Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
Trang 20Khóa luận tết nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
Trang 21CHƯƠNG 2:
THỰC NGHIỆM
Trang 22Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
a
2.1 NGUYEN LIEU, HOA CHAT, THIẾT BỊ
21.4 Nguyên liệu
Mẫu cây Euphorbia hirta L được thu hai ở Đồng Nai vào tháng 7 nằm 2013 Mẫu
cây được phơi khô trong bóng ram dé nơi khô thoáng say ở 50-5S%C Sau đó xay thành
bột ngâm trong ethanol đẻ điều chế các cao.
21.2 Hóa chất
+ Dung môi: ethyl acetate petroleum ether, chloroform, methanol, acetone acetic
acid,
+ Silica gel: Silica gel 230 — 400 Mesh Himedia - An Độ đùng cho sắc ký cột.
+ Sắc ky bản móng loại 25DC — Alufolien 20 x 20 Kiesel gel 60 F 2s, Merck.
+ Thuốc thir hiện hình sắc ky bang mỏng: HySO,4 20%.
+ Máy soi UV.
+ Cân điện tử Sartorius Mass 620g.
+ Phd cộng hưởng từ hạt nhân 'H-NMR được thực hiện trên máy cộng hướng tử hạt
nhân Bruker AC 500, tần số cộng hưởng SOOMHz
+ Phổ cộng hưởng tử hạt nhân !"C-NMR kết hợp kỹ thuật DEPT được thực hiện trên máy cộng hướng từ hạt nhân Bruker AC S00, tan số cộng hưởng 12SMHz.
lat cá phd được ghi tại phòng phan tích cấu trac Viện Hóa Học - Viện Khoa Học
va Công Nghệ Việt Nam 18 - Hoàng Quốc Việt quận Cau Giấy, Ha Nội
Trang 15
Trang 23Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
2.2 CÔ LẠP CÁC HỢP CHAT HỮU CƠ TRONG CAY CO SỮA LA LỚN
12 kg mẫu cây khô được ngâm với ethanol 96°, dich chiết được gom lại rồi cô
đặc bảng máy cất quay đưới áp suất giảm thu được 635 gam cao thô Cao cthanol thô
được chiết long - long lần lượt với ether dau hoa, ethyl acetate thu được cao ether dâu
hoa (60.4 gam) cao ethyl acetate (335,27 gam) Quá trình thực hiện được tóm tat theo
Sơ đỏ 2.1.
Sắc ký cột silica gel phan cao ethyl acetate (335.27 gam) với hệ dung môi ED:EA
có độ phân cực tang dan Dịch tử cột sắc ký được hứng vào các bình tam giác 250 ml
Sau đó cô quay thu hỏi dung môi phan cao thu được đựng vảo các hũ bi Dùng sắc ky
bang mong dé kiểm tra phần cao thu được, những phan giống nhau gom lại thành một phan đoạn Két qua thu được 5 phan đoạn kí kiệu là EAI-5, các phân đoạn được trình
Một vết tròn rõ màu | Khảo sát thu
vàng, có vết dơ được EHI
103,401 EA:Me (10:1) Chua khao sat
Chua khao sat
s=Ì
Nhiều vẻt
EA:Mc (5:5)
|
Trang 24Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
2.2.1 Sắc ky cột phân đoạn EAS
Phan cao thu được từ phân đoạn EA 1 tiếp tục sắc ký cột silica gel với hệ dung môi
ED:EA ty lệ 5:5, Dịch từ cột sắc ky được hứng vào các bình tam giác 250 ml Sau đó,
có quay thu hỏi dung mỗi, phân cao thu được đựng vào các hũ bi Dùng sắc ký bảng
mong dé kiểm tra phân cao thu được những phân giong nhau gom lại thành một phan
đoạn Kết qua thu được 3 phan đoạn các phân đoạn được trình bay trong bảng 2.2
Bang 2.2: Sắc ký cột phân đoạn EA.1
Chưa khảo sat
2.2.2 Sắc ký cột phân đoạn EA 1.2
Sac ký cột silica gel phân đoạn EA.1.2 (6.456 g) với hệ dung môi ED:EA với ti
lệ (7:3) Kết quả thu được 8 mẹ hợp chất màu vàng Kiểm tra bằng sắc ký bảng mỏng
với hệ dung môi C:Me (9:1) giải ly nhiều lan cho một vét tròn, rd mau vàng với Ry
0.59, Hợp chat nảy được ký hiệu là EHI.
2.2.3 Sắc ký cật phân đoạn E.4.2
Phan cao thu được từ phân đoạn EA.2 (54.502 g) tiếp tục sắc ký cột silica gel với
hệ dung môi ED: BA ty lệ 3:7 Dịch từ cột sắc ký được hứng vảo các binh tam giác 250
ml Sau đỏ, cô quay thu hỏi dung môi phan cao thu được đựng vào các hũ bi Dùng sắc
—————————.
Trang 17
Trang 25Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
ky bảng móng dé kiểm tra phần cao thu được những phần giống nhau gom lại thành
một phân đoạn Kết quá thu được 3 phân đoạn các phân đoạn được trình bay trong
bảng 2.3
Sắc ký bảng mỏng
Khối lượng Dung môi (với thuốc thử hiện
(gam) giải ly hình là H;SO;
20%)
Nhiéu vết cam đẻ
nhau vết dơ Chưa khảo sát
Chưa khao sát
Phan cao thu được từ phân đoạn EA.2.1 được tiếp tục sắc ký cột silica gel với hệ
dung môi ED:EA có độ phân cực tăng dan Kết qua thu được 4 phân đoạn, các phân
đoạn được trinh bay trong bang 2.4.
Bang 2.4: Sắc ký cột phân đoạn EA.2.I
F Sắc ky bảng mong
Phân Khôi lượng Dung môi
| (với thuốc thử hiện Ghi chú
| #44, (gam) giải là |
| hình là H;SO, 20%) |
Trang 18
Trang 26Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
ED:EA (2:8) | Vét cam vét do mờ
Vét đen tròn, vết do
ED:EA (2:8)
mờ.
2.2.5 Sắc ky cột phân đoạn BA.2.1.4
Sắc ký cột silica gel phân đoạn EA.2.1.4 (5.486 g) giải ly bằng hệ dung môi C:Me
với tí lệ 10:1 Kết qua thu được 3 phân đoạn các phân đoạn được trình bay trong bảng
2.5.
Bảng 2.5: Sắc ký cột phân đoạn EA.2.1.4
Sắc ký bảng mỏng(với thuốc thử hiện Ghi chú
hình là H:SO, 20%)
Sắc ký cột silica gel tiếp tục trên phân đoạn EA.2.1.4.1 (0,341 g) giải ly bằng hệ
dung môi C:Me:Aa với ti lệ 9: |:0,1 Kết quả thu được 4 mg chat ở dạng bột mau trắng
kí hiệu EH3.
Trang 27Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
~ Chiết long - long với ether dầu
hoa, ethyl acetate
~C6 quay thu hẻi dung môi
Cao ether dầu hoa (ED)
(60 g)
Cao ethyl acetate (EA)
(335,27 g)
Trang 28Khoa luận tết nghiệp Nguyễn Thị Mỹ Hạnh
So đồ 2.2: Qui trình cô lập hợp chat EHI từ cao ethyl acetate
Cao ethy! acetate EA
(335.75 g)
~ Tiến hành sắc ký cột silica gel.
~ Hệ dung môi ED : EA
~ Cô quay thu hồi dung môi
EA.I EA.2 EA3 EA4 EA.S
