đề tài ''''thiết kế vector biểu hiện gen mã hóa legumain”''''

Tình hình ung thư trên thế giới và Việt Nam -Theo ước tính củaTổ chức ung thư Liên hợp quốc, vào năm 2030 có khoảng 13,2 triệu người chết do ung thư.. - Hiệp hội nghiên cứu ung thư quốc

Viện Đại học Mở Hà Nội

Khoa Công nghệ sinh học

NỘI DUNG ĐỀ TÀI

TỔNG QUAN

Bệnh nhân ung thư

Tình hình ung thư trên thế giới và

Việt Nam

-Theo ước tính củaTổ chức ung thư Liên hợp quốc, vào năm 2030 có khoảng 13,2 triệu người chết

do ung thư

- Hiệp hội nghiên cứu ung thư quốc tế - IARC

cũng cho biết, khoảng 21,4 triệu người mắc ung

thư mới sẽ được phát hiện vào năm 2030

- Trung bình mỗi năm ở VN có 75.000 người

tử vong do bệnh ung thư, hơn 126 nghìn ca mới

mắc ung thư trong năm 2010, Hội Phòng chống

Các phương pháp điều trị ung thư

- Phương pháp điều trị tại chỗ

- Phương pháp điều trị toàn thân

- Ngoài các phương pháp điều trị trên, hiện

nay có nhiều nhà nghiên cứu đã ứng dụng

enzyme trong điều trị ung thư.

+ Điều trị ung thư não bằng E amphinase của ếch.

+ Enzyme CHIP trong điều trị ung thư vú

Gới thiệu protease legumain

Cấu trúc không gian của legumain

+ Legumain là một protease phân giải protein.

+ Tồn tại trong cả động vật và thực vật

+ Đặc hiệu cho sự thủy phân của liên kết

asparaginyl

+ Hoạt động tối đa ở pH=5,5

+ Legumain được biểu hiện cao ở một số loại khối u như: tuyến tiền liệt, đại tràng và ung thư vú

Mục đích đề tài

Thiết kế vector biểu hiện gen mã hóa

legumain

Hình ảnh pET-32c(+)

- Hai enzyme cắt đầu so le EcoRI và HindIII

5’…G AATTC…3’

3’…CTTAA G…5’

Vị trí cắt của EcoRI

5’…A AGCTT…3’3’…CTTAA G…5’

Vị trí cắt của HindIII

- Cặp mồi thiết kế đặc hiệu cho phản ứng PCR

T7F: 5’-TAATACGACTCACTATAGGG-3’T7R: 3’-TAGTTATTGCTCAGCGGTGG-5’

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Kết quả xử lý vector tách dòng pBT-legumain

với enzyme EcoRI và HindIII

1

1 2 3

Gen mã hóa legumain(900bp)

1000bp 750bp

Giếng 1: Thang DNA chuẩn (Fermantas)

Giếng 2: pBT-legumain gốc

2 Kết quả tinh sạch đoạn gen mã hóa legumain

3 Kết quả xử lý vector biểu hiện pET-32c(+)

với enzyme EcoRI và HindIII

1 2

Giếng 1 pET-32c(+) gốc không xử lý với enzyme Giếng 2 pET-32c(+) sau khi xử lý với 2 enzyme

4 Kết quả biến nạp sản phẩm gắn kết pET-32c(+)

và gen legumain

Đĩa Petri chứa khuẩn lạc sau khi biến nạp

5 Kết quả PCR từ khuẩn lạc chọn dòng vector

pET-32c(+)/legumain

1 2 3 4 5 6

1600bp 2000bp

1500bp

Giếng 1: Thang DNA chuẩn của (Fermantas)

6 Ảnh Chromas kết quả sequence

1 atgagcgata aaattattca cctgactgac gacagttttg acacggatgt

51 actcaaagcg gacggggcga tcctcgtcga tttctgggca gagtggtgcg

101 gtccgtgcaa aatgatcgcc ccgattctgg atgaaatcgc tgacgaatat

151 cagggcaaac tgaccgttgc aaaactgaac atcgatcaaa accctggcac

201 tgcgccgaaa tatggcatcc gtggtatccc gactctgctg ctgttcaaaa

251 acggtgaagt ggcggcaacc aaagtgggtg cactgtctaa aggtcagttg

301 aaagagttcc tcgacgctaa cctggccggt tctggttctg gccatatgca

351 ccatcatcat catcattctt ctggtctggt gccacgcggt tctggtatga

401 aagaaaccgc tgctgctaaa ttcgaacgcc agcacatgga cagcccagat

451 ctgggtaccg acgacgacga caaggccatg ggatatctgt ggatcc GAAT

501 TCTGATCAAC AGGCCCAATG GCACAGATGT CTATCAGGGA GTCCCGAAGG

551 ACTACACTGG AGAGGATGTT ACCCCACAAA ATTTCCTTGC TGTGTTGAGA

601 GGCGATGCAG AAGCAGTGAA GGGCATAGGA TCCGGCAAAG TCCTGAAGAG

651 TGGCCCCCAG GATCACGTGT TCATTTACTT CACTGACCAT GGATCTACTG

701 GAATACTGGT TTTTCCCAAT GAAGATCTTC ATGTAAAGGA CCTGAATGAG

751 ACCATCCATT ACATGTACAA ACACAAAATG TACCGAAAGA TGGTGTTCTA

801 CATTGAAGCC TGTGAGTCTG GGTCCATGAT GAACCACCTG CCGGATAACA

851 TCAATGTTTA TGCAACTACT GCTGCCAACC CCAGAGAGTC GTCCTACGCC

901 TGTTACTATG ATGAGAAGAG GTCCACGTAC CTGGGGGACT GGTACAGCGT

951 CAACTGGATG GAAGACTCGG ACGTGGAAGA TCTGACTAAA GAGACCCTGC

1001 ACAAGCAGTA CCACCTGGTA AAATCGCACA CCAACACCAG CCACGTCATG

1051 CAGTATGGAA ACAAAACAAT CTCCACCATG AAAGTGATGC AGTTTCAGGG

1101 TATGAAACGC AAAGCCAGTT CTCCCGTCCC CCTACCTCCA GTCACACACC

1151 TTGACCTCAC CCCCAGCCCT GATGTGCCTC TCACCATCAT GAAAAGGAAA

1201 CTGATGAACA CCAATGATCT GGAGGAGTCC AGGCAGCTCA CGGAGGAGAT

1251 CCAGCGGCAT CTGGATGCCA GGCACCTCAT TGAGAAGTCA GTGCGTAAGA

1301 TCGTCTCCTT GCTGGCAGCG TCCGAGGCTG AGGTGGAGCA GCTCCTGTCC

1351 GAGAGAGCCC CGCTCACGGG GCACAGCTGC TACCCAGAGG CCCTGCTGCA

7 Kết quả xác định trình tự legumain

- Gen này có sự tương đồng 100% với các trình tự

có mã số đăng ký AY409389, DQ895070 và

SY:DQ891884 tại ngân hàng gen quôc tế

8 Trình tự amino acid

1 MSDKIIHLTD DSFDTDVLKA DGAILVDFWA EWCGPCKMIA PILDEIADEY

51 QGKLTVAKLN IDQNPGTAPK YGIRGIPTLL LFKNGEVAAT KVGALSKGQL

101 KEFLDANLAG SGSGHMHHHH HHSSGLVPRG SGMKETAAAK FERQHMDSPD

151 LGTDDDDKAM GYLWIRILIN RPNGTDVYQG VPKDYTGEDV TPQNFLAVLR

201 GDAEAVKGIG SGKVLKSGPQ DHVFIYFTDH GSTGILVFPN EDLHVKDLNE

251 TIHYMYKHKM YRKMVFYIEA CESGSMMNHL PDNINVYATT AANPRESSYA

301 CYYDEKRSTY LGDWYSVNWM EDSDVEDLTK ETLHKQYHLV KSHTNTSHVM

351 QYGNKTISTM KVMQFQGMKR KASSPVPLPP VTHLDLTPSP DVPLTIMKRK

401 LMNTNDLEES RQLTEEIQRH LDARHLIEKS VRKIVSLLAA SEAEVEQLLS

501 PPLSNN*

KIẾN NGHỊ

- Tiếp tục nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa

legumain trên các hệ biểu hiện hợp lý

- Nghiên cứu để tối ưu hóa quá trình biểu hiện

và tinh chế legumain phục vụ cho các nghiên cứu tiếp theo