Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)

Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)Báo cáo thực hành sinh học vi sinh nhóm 2 (NLU)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC



BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH

SINH HỌC VI SINH

Môn học: Sinh học vi sinh

Giảng viên hướng dẫn: Trương Phước Thiên Hoàng

Nhóm sinh viên thực hiện: Nhóm 2

Năm học: 2021-2022

Tháng 10-2022

MỤC LỤC

1.Tuần 1: Gói đĩa 3 2.Tuần 2: Pha môi trường và đổ đĩa 4 3.Tuần 3: Nhuộm gram,quan sát nấm sợi và cấy khuẩn trong tủ cấy 6

TUẦN 1: GÓI ĐĨA

Trải giấy báo lên bàn, sau đó đặt khoảng 10 đĩa petri lên trên.Dùng hai ngón cái lấy giấy báo đẩy lên 2/3 đĩa sau đó dùng 2 ngón trỏ đẩy các đĩa vô cho đều.Kết hợp ngón cái và ngón trỏ bẻ giấy báo xuống.Dùng cả cụm tay đẩy lên một tí và giữ chặt một bên thực hiện gấp bên còn lại.Vuốt nếp vừa tạo sau đó dùng ngón cái,ngón trỏ

và ngón giữa gấp nếp giấy báo cho sát xuống vành đĩa.Ta thực hiện tương tự cho phần còn lại đến khi hết tờ báo.Cuối cùng ta gấp phần giấy dư và nhét chúng

xuống dưới phần gấp để cố định

Hình 1a,1b Đĩa sau khi được gói hoàn chỉnh

TUẦN 2: PHA MÔI TRƯỜNG VÀ ĐỔ ĐĨA

1 Pha chế môi trường

15 phút

Hình 2: Bình chứa môi trường sau khi pha chế

ta hơ nhẹ qua chỗ mở nắp đĩa

TUẦN 3: NHUỘM GRAM, QUAN SÁT NẤM SỢI VÀ CẤY KHUẨN

TRONG TỦ CẤY 1.Nhuộm gram

-Chuẩn bị vết bôi và cố định vi khuẩn bằng đèn cồn từ 3-5 phút

-Dùng dung dịch crystal violet phủ lên vết bôi sau đó trải đều và để trong 1 phút -Để nghiêng phiến kính 45°, rửa dưới vòi nước cho trôi hết phần thuốc nhuộm dư (giọt cuối cùng chảy khỏi phiến kính không còn màu)

-Phủ lên vết bôi dung dịch lugol và trải đều Để yên 1 phút

- Để nghiêng phiến kính 45°, tẩy màu bằng dung dịch alcohol 95% cho đến khi giọt cuối cùng chảy ra khỏi phiến kính không còn màu (thông thường khoảng 10 –

20 giây) Đây là bước quan trọng nhất Nếu bị tẩy màu quá mức, một số vi khuẩn Gram dương sẽ bị mất màu tím và sẽ trở thành Gram âm sau khi nhuộm màu lần thứ 2

-Ngay lập tức rửa phiến kính dưới vòi nước

-Phủ lên vết bôi dung dịch Safranin và trải đều Để yên 1 phút

-Rửa dưới vòi nước

-Thấm nhẹ bằng giấy thấm Hơ khô phiến kính trước khi quan sát dưới kính hiển vi -Sử dụng dầu soi kính và vật kính dầu để quan sát

1.2 Quan sát vi sinh vật vừa nhuộm dưới kính hiển vi

Hình 3 Quan sát vi khuẩn Bacillus subtilis dưới hính hiển vi

Khuẩn Bacillus subtilis là trực khuẩn nhỏ, bắt màu tím Gram dương, có thể ở dạng đơn lẻ hoặc kết thành chuỗi ngắn

Hình 4 Quan sát vi khuẩn E.coli dưới hính hiển vi

E.coli có dạng hình cầu là cầu khuẩn Gram âm nên khi nhuộm màu sẽ bắt màu hồng nhạt

Hình 5 Quan sát vi khuẩn Staphylococcus sp dưới hính hiển vi

Staphylococcus sp hay được gọi là tụ cầu khuẩn là khuẩn Gram dương nên khi nhuộm sẽ bắt màu tím, không tạo nha bào không di động sắp xếp theo mọi hướng thường tạo thành cụm có dạng trông giống như chùm nho

2.Quan sát nấm sợi

Hình 6 Quan sát nấm Trichoderma dưới hính hiển vi

Sau khi quan sát ta thấy được các đặc điểm của nấm Bào tử nấm có dạng hình elip, màu xanh lục đính trên những sợi nấm.Sợi nấm có khả năng phân nhánh nhiều.Bào tử đính là một khối tròn mọc ở đầu của cuống sinh bào tử

Hình 7 Quan sát nấm Aspergillus sp dưới hính hiển vi

Sau khi quan sát ta thấy được các đặc điểm của nấm Bộ phận sinh bào tử của Aspergillus sp có cấu trúc gồm đính bào đài mọc từ tế bào chân, ngọn đính bào đài, tiểu bào đài trên tiểu bào đài sinh ra các bào tử có kích thước nhỏ

3 Cấy khuẩn trong tủ cấy

3.1 Cách thực hiện

-Cấy móc môi trường Potato Dextrose Agar(PDA)

+Vệ sinh tủ cấy bằng cồn 70° theo một chiều

+Lau vật dụng: đĩa petri, đèn cồn, bút, bật lửa, hũ đựng que cấy,…

+Chuẩn bị mẫu cấy, đĩa petri có chứa môi trường nuôi cấy đã được hấp khử khuẩn

+Hơ que cấy móc đến khi đỏ đầu 3 giây, để kiểm tra xem qua cấy có nóng không ta để que cấy chạm vào nơi không có nấm hoặc không có khuẩn

+Hơ bề mặt đĩa mẫu sau đó mở ra ta cào nhẹ lên phần có nấm,đóng nắp lại

và hơ qua lần nữa để khử khuẩn

+Lấy đĩa chứa môi trường và hơ để khử khuẩn đĩa, sau đó ta cấy 1 hoặc 2 điểm trên bề mặt đĩa

+Cuối cùng ta hơ đĩa và que cấy để khử khuẩn

Hình 8a,8b Mẫu sau khi cấy móc

Đối với hình 8a khuẩn lạc xuất hiện và tương đối đều,đẹp

Đối với hình 8b khuẩn không xuất hiện Nguyên nhân có thể là do trong quá trình thao tác ta đã hơ que cấy quá nóng mà không để nguội nên đã làm chết khuẩn.Ta khắc phục bằng cách sau khi hơ que cấy móc đợi que đỏ đầu 3 giây, để kiểm tra xem qua cấy có nóng không ta để que cấy chạm vào nơi không có nấm hoặc không

có khuẩn nếu như agar không chảy thì có nghĩa que đã hết nóng

-Cấy ria trong môi trường giá đậu(GĐ)

+Vệ sinh tủ cấy bằng cồn 70° theo một chiều

+Lau vật dụng: đĩa petri, đèn cồn, bút, bật lửa, hũ đựng que cấy,…

+ Chuẩn bị mẫu cấy, đĩa petri có chứa môi trường nuôi cấy đã được hấp khử khuẩn

+Hơ que cấy móc đến khi đỏ đầu 3 giây, để kiểm tra xem qua cấy có nóng không ta để que cấy chạm vào nơi không có nấm hoặc không có khuẩn

+Hơ đĩa mẫu sau đó mở ra ta cào nhẹ lên phần có nấm, đóng nắp lại và hơ qua lần nữa để khử khuẩn

+Lấy đĩa chứa môi trường và hơ để khử khuẩn đĩa, đường thứ nhất tạo sinh khối dày trong 1/3 đĩa và đi từ trong ra ngoài, sau đó xoay đĩa một lần chạm đường thứ nhất qua đường thứ hai nhưng thưa ra 1 tí, đường cuối cùng bắt từ đường thứ hai và cấy theo hình zíc zắc

+ Cuối cùng ta hơ đĩa và que cấy qua đèn cồn để khử khuẩn

Hình 9a,9b Mẫu sau khi cấy ria

Đối với hình 9a mặc dù thao tác đúng ba đường nhưng đường cấy thứ nhất cấy rất

ít, dù khuẩn lạc vẫn lên nhưng do ta lấy sinh khối nhiều chứ không lên khuẩn lạc đơn.Vì vậy ta không thể xác định được khuẩn lạc này là gì.Ta có thể khắc phục bằng cách cấy đường thứ nhất dày lên một tí và phải tập luyện thêm

Đối với hình 9b cấy đúng thao tác,cấy đã ra khuẩn lạc đơn nhưng bị nhiễm

Nguyên nhân nhiễm có thể do môi trường không khí xung quanh, do lúc ta làm việc rất đông người nên môi trường đã bị ảnh hưởng; thao tác thực hiện chưa được

kĩ nên đã tạp nhiễm một số vi sinh vật xung quanh.Ta khắc phục bằng thao tác kĩ hơn và thực hiện gần đèn cồn để hạn chế vi sinh vật xung quanh

-Cấy trang môi trường giá đậu(GĐ)

+Vệ sinh tủ cấy bằng cồn 70° theo một chiều

+Lau vật dụng: đĩa petri, đèn cồn, bút, bật lửa, hũ đựng que cấy,…

+ Chuẩn bị mẫu cấy, đĩa petri có chứa môi trường nuôi cấy đã được hấp khử khuẩn

+Lắc đều mẫu và hơ đầu ống nghiệm qua ngọn đèn cồn

+Dùng pipet hút lên xuống vài lần sau đó hút 100 µL

+Xoay đĩa dưới ngọn đèn cồn để khử khuẩn bề mặt sau đó bơm mẫu vào và

hơ nhẹ chỗ vừa mở nắp

+Lấy que cấy gạt bớt cồn sau đó hơ qua ngọn lửa đèn cồn

+Để tránh que cấy nóng ta tận dụng bằng cách gạt bớt hơi nước trên nắp đĩa mục đích để hơi nước không nhỏ xuống đĩa

+Ta cấy cho thật đều tay, phải cấy vô vành đĩa và cấy cho thật khô Cách để nhận biết được mẫu đã khô khi ta cảm nhận được độ rít

+Cuối cùng ta hơ đĩa và que cấy qua đèn cồn để khử khuẩn

Hình 10a,10b Mẫu sau khi cấy trang

Đối với hình 10a đã đáp ứng được hai yêu cầu là cấy đều tay và mẫu đã khô.Tuy nhiên vẫn thiếu xót trong việc cấy vô những vành đĩa nên có thể dẫn đến sai kết quả.Ta khắc phục bằng cách cấy vô vành đĩa hơn nữa

Đối với hình 10b cấy chưa được đều tay, cấy chưa đều vành đĩa và đĩa đã bị nhiễm Nguyên nhân nhiễm có thể do môi trường không khí xung quanh, do lúc ta làm

việc rất đông người nên môi trường đã bị ảnh hưởng; thao tác thực hiện chưa được

kĩ nên đã tạp nhiễm một số vi sinh vật xung quanh.Ta khắc phục bằng cách cấy đều tay hơn và để nhận biết được mẫu đã khô bằng cách cảm nhận được độ rít