Hướng dẫn sử dụng máy sắc ký lỏng hiệu năng cao của agilent 1260

 Change: cài đặt thông số, hiển thị áp suất, độhấp thu  Adjust: tinh chỉnh sắc ký đồ  Balance: đưa tín hiệu về O đối với đầu dò bơm không đưa về O được... Instrument Control• Sampler:

HDSD OPEN LAB

14.10.2016

1 TẠO METHOD

Mở phần mềm Agilent online

Các tab chính

Online Plot

 Change: cài đặt thông số, hiển thị áp suất, độ

hấp thu

 Adjust: tinh chỉnh sắc ký đồ

 Balance: đưa tín hiệu về O đối với đầu dò

(bơm không đưa về O được)

* Cách mở lại Online Plot

View  Online Signals  Signal Window 1  Enter

Các tab chính

Method and Run Control

• Tạo, chạy Sequence và Method (chỉ thựchiện với Agilent Online)

Data Analysis

• Phân tích và xử lý Data đã chạy được

Các tab chính

Thời gian

chạy mẫu

Instrument Control

• Sampler: tiêm mẫu

• Binary Pump: bơm 2 kênh

• Column Oven: gia nhiệt cho cột

• MWD (Multiple Wavelength Detector): đầu

dò đa bước sóng

• FLD (Fluorescence Detector): đầu dò huỳnh

quang

Lưu thông tin

 Trước khi chạy máy cần tạo 3 Folder ( cố định)

để lưu thông tin  chỉ làm 1 lần

• Data: chứa dữ liệu sau khi chạy

• Method: chứa phương pháp tạo mới

Tạo Thư mục cố định để lưu thông tin

Tạo 3 thư mục chính

Add đường dẫn để lưu thông tin

Add đường dẫn cho Sequence

Add đường dẫn cho Data

Add đường dẫn cho Method

Chọn OK

3 2

1

Các mục cần chú ý

Các mục cần chú ý

1 Method hiện tại

2 Squence hiện tại

3 Dòng Comment

 Lưu ý: Sau khi khởi chạy máy, 3 mục nàyphải đồng nhất với nhau về thông tin

1 Tạo Method

Load Method từ file def_LC.M (ổ C:\)

được cài sẵn trong máy  OK

Chọn Method  Edit Entire Method

 OK

Chọn OK

Ghi thông tin Method: tên mẫu, thành

phần, tên cột, pha động, số lô,

Ghi chú lại tên Method

Luôn chọn Als (tiêm tự động)  OK

Cài đặt Method

Binary Pump: bơm 2 kênh

Sampler: tiêm mẫu

Column Oven: gia nhiệt cho cột

MWD: đầu dò bước sóng

Cài đặt Method

Cài đặt Binary Pump

Binary Pump

Flow: cài đặt tốc độ dòng (từ 0.15mL/min)

Solvents:

• Stick chọn kênh A, B (kênh A = 100% - kênh B)

• 2 ô trống tiếp theo điền nhãn và tên pha động

Pressure Limits: giới hạn áp suất

• Min (áp suất tối thiểu để chạy qua cột = 10 bar)

• Max = áp suất chạy qua cột + 30 bar

*Lưu ý: Không thay đổi số liệu ở cột

Advanced

Cài đặt Sampler

 Mode  Flush Port: rửa bằng dung môi ngoài

 Mode  Wash Vial: rửa bằng dung môi đặc biệt  chọn vị trí rửa kim ở ô Location và số lần rửa kim ở 1 Vial ở ô Repeat

 Stoptime:

• Chọn As Pump/No limit

Rửa kim bằng chính pha động

Rửa kim với dung môi ngoài hoặc

Vial đặc biệt

*Lưu ý: Không thay đổi số liệu ở cột

Advanced

Cài đặt Column Oven

Column Oven

Temperature: cài đặt nhiệt độ cho buồng cột

• Not Controlled: không gia nhiệt

• Chọn ô trống bên dưới: cài đặt nhiệt độ từ1080oC

Stoptime:

• Chọn As Pump/Injector

*Lưu ý: Không thay đổi số liệu ở cột

Advanced

Cài đặt đầu dò MWD

MWD (Multiple Wavelength Detector)

Signals: 8 bước sóng từ AH

*Lưu ý: Không thay đổi số liệu ở cột

Advanced

Chọn OK

• Thiếu hình

Chọn OK

Lưu Method

File  Save As  Method

Đặt tên và chọn đường dẫn để lưu

Method

Đặt tên cho Method

Lưu vào ổ D:\ đã mặc định

Chọn OK

2 TẠO SEQUENCE

Mở phần mềm Agilent online

Chọn Sequence  Sequence Parameters

Chọn đường dẫn để lưu Sequence

Chọn No (vì mình chưa biết data sẽ tạo

chứa thông tin gì)

Lưu Sequence

Chọn đường dẫn mặc định là ổ D:\

Subdirectory: đặt tên cho Sequence (không có

khoảng cách, ngoặc kép, ký hiệu đặc biệt,…)

 Enter

Prefix/Counter:

• Prefix: tên được giữ cố định khi phân tích

• Counter: bộ đếm tự động khi chạy mẫu

Đặt tên theo ngày tháng năm và tên

chất cần phân tích

Chọn Yes để khởi tạo thư mục mới

Ứng dụng tự tắt sau khi chạy xong

Tạo Sequence Table

Insert Line: chèn thêm hàng

Append Line: thêm số hàng (ứng với

số Vial cần chạy)

Delete Line: xóa bỏ 1 hàng

Filldown: copy dữ liệu của hàng

Filldown Option: copy dữ liệu và mặc

định của hàng

Tạo Sequence Table

Sequence container: chọn mặc định Use

Current Configuration

Sequence location: vị trí đặt Vial

Sample name: đặt tên chuẩn và mẫu thử

Method name: chọn đường dẫn của phương

pháp đã lưu

Inj/Loc: số lần tiêm lặp lại trên 1 Vial

Những cột còn lại không cần điền

Ví dụ: cần chạy 5 Vial sẽ tạo thêm 5

hàng mới  OK

Luôn chọn Use Current Configuration

Chọn đường dẫn của phương pháp đã

lưu

Browse Method  ổ D:\

Mở Method trong đường dẫn đã lưu

Tô đậm cột hoặc tất cả hàng rồi chọn

Filldown để copy dữ liệu

Lưu ý

 Sample Container + Sample Name +

Method + Injection + Inj/Loc khi stick chọn

Filldown thì giá trị sẽ được giữ nguyên

 Sample Location khi chọn Filldown thì giátrị sẽ đếm tăng dần lên (tương tự nếu Sample Name giá trị có chứa số phía sau cũng sẽ được

đếm tăng dần lên)

Khi chọn Filldown giá trị ở cột Sample

Location sẽ được đếm tăng dần lên

Ít khi dùng Filldown Option

Chọn tất cả hàng + Filldown

Chọn OK

Lưu Sequence

File  Save As  Sequence Template

Chọn thư mục để lưu Sequence (ổ D:\)

 đặt tên cho Sequence  OK

*Lưu ý: mục 1, 2, 3 thông tin phải

giống nhau

3 2

1

Chạy nhiều Method

Chạy nhiều Sequence

Chọn đường dẫn đã lưu Sequence

Kiểm tra lại Sequence  Next

Xem lại thông tin  Nếu OK chọn Next

Chọn Add to back of queue

Add xong máy sẽ bắt đầu chạy

3 HƯỚNG DẪN CHẠY MÁY

 Sau khi tạo Sequence phải load Method đểmáy chạy 30’

 Mục đích: để áp suất và đường nền ổn định

Mở On tất cả các tab cần chạy

 Lưu ý: mỗi lần chạy máy nên Purge kênh để

máy chạy được ổn định

Purge kênh: nhớ xoay van Drain

ngược chiều kim đồng hồ

Chỉnh Flow  OK

Kênh đang được Purge

Theo dõi Online Plot để xem đường chuẩn của

bơm và đầu dò ổn định rồi mới tiến hành chạy

máy.

Sau khi đường nền ổn định  Start Sequence 

No (không lưu vì đây chỉ là thao tác Purge kênh)

Purge xong  chỉnh lại Flow ban đầu  OK

Theo dõi đường nền

Start Sequence  Chọn No

Theo dõi Sequence đang chạy trong tab

Run Queue

Tạo Method tiếp theo (phần mềm Agilent

Sequence thứ 1)

4 XỬ LÝ DỮ LIỆU

 Bằng phần mềm Agilent Offline

 Data Analysis  chọn đường dẫn lưu Data đã

chạy (xem cột bên trái “in progess”)

Chọn Data Analysis

Xem Data đang chạy

Lọc Data

 Data  Integration

 Chọn Edit trên Sheet Integration

 Chọn Set Integration

• Nhấp chuột lần 1 ở sát trục X (không tính giá trị)

• Nhấp chuột lần 2 ở bitch cần lấy (bắt đầu tính giá trị)

• Nhấp chuột lần 3 ở sau bitch cần lấy (không tính giá trị sau đó)

• Chọn biểu tượng cuốn sách trên Sheet Integration để

lưu lại dữ liệu đã được lọc  Chọn Yes

Data  Integration

Chọn Edit trên Sheet Integration

Chọn Set Integration

Click chuột lần 1 (chưa tính giá trị)

Click chuột lần 2 (bắt đầu tính giá trị)

Click chuột lần 3 (không tính giá trị

sau đó)

Lưu lại dữ liệu đã lọc

Chọn Yes

Thông tin Data đã được lọc

Dựng Đường chuẩn

 Click vào hàng giá trị cần dựng đường chuẩn

rồi chọn Calibration  New Calibration

Table

• Chọn mặc định Automatic Setup

• Điền vào giá trị đúng của Vial ở Level 1 

OK  đặt tên bitch  Enter

 Click vào hàng giá trị thứ 2 rồi chọn

Calibration  Add Level  điền giá trị

 Làm tương tự với giá trị thứ 3

Calibration  New Calibration Table

Luôn chọn Automatic Setup

Điền vào giá trị đúng của mẫu đã chạy

Đường chuẩn của 1 điểm

Đặt tên cho bitch  Enter

Tạo đường chuẩn qua điểm thứ 2

 Sau khi dựng dường chuẩn qua 3 điểm

 R = 0.999 thì kết quả mới đáng tin cậy

Bỏ điểm Zero trong đường chuẩn

Origin: Include > Ignore

R=0.9998  KQ đáng tin cậy

MỘT SỐ THAO TÁC KHI CHẠY MÁY

 Kiểm tra và sửa lỗi

 Tạo bản Backup và Restore

 Cài đặt Rửa bơm

 Thêm hoặc bỏ Detector

Kiểm tra và sửa lỗi

 View  Logbook  Current logbook

 Những lỗi thường gặp: áp suất cao thấp,

không mở được đèn,…

 Báo lỗi từng module  đèn đỏ status sẽ sáng

 Khi 4 module cùng báo lỗi  kiểm tra Leak sensor và vệ sinh lại

 Sau khi sửa lỗi thì chọn On để Clear Error

Kiểm tra lỗi

Áp suất của Binary Pump không đạt

nên báo lỗi

Binary Pump  click chuột phải chọn

Method

Chỉnh lại Áp suất  Chọn OK và mở

lại Binary Pump

Tạo Backup & Restore

 Để tránh mất dữ liệu khi bộ nhớ của máy bịđầy hoặc máy cài lại Win

 Mỗi tháng nên tạo bản Backup 1 lần để tránhmất dữ liệu

Tạo Backup & Restore

Chọn System protection

Chọn Recommended restore  Next

Chọn Finish

Rửa bơm

 Binary Pump  click chuột phải chọn

Control

 Chọn Seal Wash:

• Single Wash: rửa ngay sau mỗi lần bơm

• Periodic: bơm xong hết các mẫu mới rửa

• Duration: thời gian rửa bơm (thường là

0.5min)

 Lưu ý: Thường chọn Single Wash

Rửa bơm

Binary Pump  chuột phải Control

Chọn Seal Wash  Single Wash

Nhập Duration: thời gian rửa bơm

Thêm hoặc bỏ Đầu dò

 Chỉ sử dụng 1 trong 2 đầu dò khi chạy mẫu

 Mở nguồn Detector muốn thêm vào

 Instrument  Instrument Configuration

 Auto Configuration  OK

 Chọn IP address: 192.168.254.11 (số cố định)

 OK

 Nhớ kiểm tra nguồn các module

 Tắt và mở lại phần mềm Agilent Online  hiện bảng thông báo  Cancel

Add or Remove Detector

Instrument  Instrument Configuration

Chọn Auto Configuration

Chọn OK

Nhập IP address  OK

Detector mới đã được thêm vào

Remove Detector không cần dùng

Chọn OK

Mở lại phần mềm Agilent Online

Chọn Cancel

• Thiếu hình

Đã add đầu dò mới

Tuổi thọ của đèn D2