Tổng quan về fish Vi sinh vật môi trường

Tổng quan về FISH Tổng quan về FISH FISH (fluorescence in situ hydridization) – kĩ thuật lai huỳnh quang tại chỗ Là sự kết hợp chính xác của phép lai 1 đoạn oligonucleotit ( đầu dò) có gắn tín hiệu hu[.]

I Tổng quan về FISH

FISH (fluorescence in situ hydridization) – kĩ thuật lai huỳnh quang tại chỗ

Là sự kết hợp chính xác của phép lai 1 đoạn oligonucleotit ( đầu dò) có gắn tín hiệu huỳnh quang với 1 trình tự ADN đích đặc trưng

Bằng quan sát trực quan từ kính hiển vi huỳnh quang, các phân tử huỳnh

quang phát sáng với những màu sinh động cho phép hiển thị các đoạn ADN , nhiễm sắc thể hay tế bào đích

Có thể nhận dạng, liệt kê và định vị các tế bào sinh vật trong mẫu môi

trường tự nhiên hay trong các mô bệnh phẩm

II Quy trình thực hiện

1 Chuẩn bị đầu dò:

• lựa chọn đầu dò và lựa chọn thuốc nhuộm huỳnh quang

2 Chuẩn bị mẫu

FISH dò tìm và phát hiện ra các trình tự acid nucleic của các loài vi sinh vật mong muốn bằng cách dùng đầu dò được đánh dấu huỳnh

quang lai đặc hiệu với các trình tự đích đặc hiệu bổ sung với nó bên

trong tế bào nguyên vẹn (không cần phá vỡ tế bào)

Lựa chọn đầu dò

• Đầu dò: là những

oligonucleotide dài từ

15-30 bp được tạo từ

một thiết bị tổng hợp

tự động, có trình tự bổ

sung với các rRNA 16s

của tế bào sinh vật

• Xem xét đến tính đặc

hiệu, độ nhạy & khả

năng xâm nhập vào tế

bào

Lựa chọn đầu dò

• rARN 16S: ổn định về mặt di truyền, số lượng bản sao nhiều và cấu trúc được bán bảo tồn -> nhận biết và định danh các loài vi sinh vật trở nên dễ dàng hơn

Đánh dấu huỳnh quang

(e) đầu dò

polyribonucleotide

(b) gắn các nucleotide đầu 3’

(c) Dùng chất chỉ thị

(d) đánh dấu bằng enzym

(a) Đánh dấu đầu 5’

DIG

TSA HRP

Bảng 1: Một số thuốc nhuộm được sử dụng để dò tìm vi sinh vật bằng phương pháp FISH

Chuẩn bị mẫu

Mẫu chứa vsv &

đầu dò

Chất tạo tủa:

ethanol

(methanol)