Đồ án tìm hiểu phương pháp chuyển gen thực vật tạo gạo vàng giàu vitamin a

ĐàNẵng,ngày22tháng12năm2009 Sinhviênthựchiện VõKhắcPhi... Theohướngnày,cáctrungtâmnghiêncứulúagạotrênthếgiớiđãtiếnhànhnghiêncứutạođượcnhiềudònglúagiàuβ- carotentiềnvitaminAbằngphươngpháp

Cuốicùngxinchophépconđượccảmơncácbạntronglớp09SHLTđãđộngviên,giúpđỡchotôihoànthànhĐồánnày.Xin

đượctriântấtcảnhữngngười

ĐàNẵng,ngày22tháng12năm2009

Sinhviênthựchiện VõKhắcPhi

Gạolàthứcănchínhchohơn3tỷngườitrênthếgiới,cungcấpchủyếunguồnnănglượngvàproteintrongkhẩuphầnăncủangườidânchâuácũngnhưchâuPhi.Hạnchếởgạolàkhôngcóhoặcchứaítcácvichấtdinhdữơngthiếtyếu,nhưkhôngchứavitaminA,rấtítvitaminE,sắtvàkẽm.Thêmvàođó,nhiềutrườnghợpvichấtlạiởdạngkhóhấpthu.Điềunàylànguyênnhânchínhgâyrahiệntượngsuydinhdưỡngởnhiềunướcđangpháttriểnnơingườidândựavàogạolànguồnthứcănchính.Hiệnnaytrênthếgiớicókhỏangtrên2tỷngườisuydinhdưỡngdothiếuchấtvilượngsắt,vitaminA,iốtvàkẽm.Vìvậy,thiếuvichấtdinhdưỡngđangcònlàvấnđềsứckhỏecộngđồngởcácnướcđangpháttriển.ởViệtNam,tìnhtrạngthiếuchấtsắt,vitaminAcònkháphổbiếnnhấtlàởcácvùngsâu,vùngxa,miềnnúi

Hậuquảchoxãhộivàcánhândothiếuvichấtdinhdưỡngrấtlớnnhưhạnchếkhảnănglàmviệc,giảmpháttriểntrítuệ,dễmắccácbệnhnhiễmtrùng.Trongcácnămqua,cáchoạtđộngchínhcủachiếnlượcthanhtoánbệnhdothiếudinhdưỡnglàbổsungvichấtbằngđườnguốngchocácđốitượngcónguycơcao,đadạnghóabữaăn,tăngcườngvichấtvàothựcphẩm.Tuynhiên,biệnphápnàychưathểgiảiquyếtđượcvấnđềvìtốnkém.CácloạithựcphẩmgiàudinhdưỡngnằmngoàIkhảnăngthunhậpcủacộngđồngdâncưnghèo.Vìvậy,hiệnnaymộtgiảiphápmớiđượcđềnghịlàchọntạocácgiốngcâytrồng,đặcbiệtlàlúa,cóchứahàmlượngcácvichấtdinhdưỡngcaohơncácgiốngđangcó.Giảipháptăngcườngvichấtbằngsinhhọc(biofortification)nàyđượcxemlàhiệuquả,kinhtếvàbềnvững

Theohướngnày,cáctrungtâmnghiêncứulúagạotrênthếgiớiđãtiếnhànhnghiêncứutạođượcnhiềudònglúagiàuβ-

caroten(tiềnvitaminA)bằngphươngphápchuyểnnạpgenquatrunggianAgrobacteriumtumef aciensvàchọnlọcbằngmannosethaythếchohệthốngchọnlọcbằngchấtkhángsinhhoặcchấtdi

ệtcỏ.Phươngphápchuyểnnạpgennàycóýnghĩatrongviệctạoracácdònglúabiếnđổigensạch,khắcphụccácmốilongạivềtínhantoàncủacâybiếnđổigenhiệnnay.Đểgópphầnphổbiếnchomọingườihiểuvềýnghĩacủaviệcnghiêncứulúa(gạo)chuyểngengiàuβ-

caroten,cũngnhưcáchthứcmàcácnhàkhoahọctạoragiốnglúanày,emđãchọnđềtài“TìmhiểuPhươngphápchuyểngenthựcvậttạogạovànggiàuvitaminA”đểvừapháttriểnkiếnthứccủabảnthânvừatạoramộtnguồntưliệuchomọingườicùngthamkhảo.Dothờigiancónhiềuhạnchế,kiếnthứcchuyênmôncònnonkémnênnhữnggìtrìnhbàytrongđềtàinàykhólòngtránhkhỏinhiềuthiếuxót.Kínhmongnhậnđượcsựhướngdẫn,giúpđỡvàgópýcủaquýthầycôvàcácbạnđểbàitìmđềtàicủatôiđượchoànthiệnhơn

1.2.Cácphươngphápchuyểngenthựcvật

Nhiềuphươngphápkhácnhauđãđượcphátminhđểđưagenvàotếbàovàmôthựcvật.KỹthuậtđơngiảnnhấtlàchuyểnDNAtrầnbằngvitiêm(microinjection),xungđiện(electroporation),súngbắngen.NgoàiracònphươngphápphứctạpvàhiệuquảhơnlàchuyểngengiántiếpnhờvikhuẩnAgrobacterium,

Tuỳthuộcvàođốitượngchuyểngenmàngườitalựachọnphươngphápchuyển

genphùhợp

1.2.1.Vitiêm

NguyêntắccủaphươngphápvitiêmlàmộtlượngnhỏDNAđượctiêmtrựctiếpvàonhântếbàophôitrầnhoặctếbàonguyênvẹnmộtcáchcơhọcdướikínhhiểnvi.Phươngphápnàychophépđưagenvàođúngvịtrímongmuốnởtừngtếbàovớihiệuquảtươngđốicao.Tuynhiêndođòihỏiphảitinhvi,tỉmỉvàcựckỳchínhxácnênhạn

Máyvithaotácgồm2phầngiốnghệtnhauđượcbốtríhaibênkínhhiểnvi,mộtdùngđểđiềuchỉnhkimtiêm,mộtdùngchokimgiữ.Tínhnăngcủamáynàylàchophépđiềuchỉnhcáckimtheokhônggian3chiều.Kimtiêmvàkimgiữđượclắpvàomáyvithaotácvàđượcnốivớisyringequaốngbằngchấtdẻođượcnạpđầydầuparafin

Vitiêmđượctiếnhànhquacácbước:nạpgenvàokimtiêmbằngphươngphápcapillar(ngâmđầukimtiêmvàodungdịchgenkhoảng10-

12giờ)hoặcbơmtrựctiếpdungdịchgenvào,lắpkimtiêmvàkimgiữvàomáyvithaotác,chuyểntrứngtiềnnhânvàođĩapetricóchứamôitrườngđượcđặtdướikínhhiểnvi,giữtrứngtiềnnhân

Ðốivớithựcvậtthìphươngphápnàyđượcsửdụngđốivớicáctếbàotiềnphôicủahợptửhoặccáctếbàotiềnphôicủahạtphấn.TuynhiênsựxâmnhậpcủagenchuyểnvàoDNAtếbàovậtchủlàmộtquátrìnhngẫunhiênvàxácsuấtđểgenchuyểnxenvàovịtríDNAvậtchủmàsẽchophépnóbiểuhiệnlàthấp.Hiệuquảcủavitiêmlàkhôngcao

1.2.2.Súngbắngen

Súngbắngen(Genegun)làmộtthiếtbịsửdụngđểđưathôngtinditruyềnvàotếbào,đượcthiếtkếđầutiênchobiếnnạpDNAngoạilaivàotếbàothựcvật.Tênchínhxácvàđầyđủcủasúngbắngenlàhệthốngphânphốihạtbiolistics(biolisticparticledeliverysystem)vàkỹthuậtnàythườngđượcgọimộtcáchđơngiảnlàbiolistics(sựkếthợpgiữahaithuậtngữbiology(sinhhọc)vàballistics(sựbắntung)).Mặcdùcónhiềuthiếtkếkỹthuậtkhácnhaunhưngnguyênlýchungcủaphươngphápnàylàsửdụngáplựcxungcủakhíheliumđểgiatốccáchạt

Súngbắngenbaogồmhaibuồngbằngthépkhônggỉ,kíchthước6“x7“x10“nốivớihaibơmchânkhông.DNAngoạilaiđượcgắnvàocáchạttungstencóđườngkínhrấtnhỏ,khoảng1µm(cáckimloạinăngkhácnhưvàngvàbạccũngđượcsửdụngnhưngkhôngthườngxuyêndogiácảđắt).Cáchạtnàyđượcđặttrênmộtcáiđĩaởmặtbêntrongcủasúng.Sựbùngnổkhíheliumở1000psilàmchocáiđĩabắnvềphíatrướcvớitốcđộ1300food/

s,tươngđươngvớitốcđộkhimộtviênđạnrờikhỏinòngsúng.Mộttấmchắnlàmdừngđĩalạivàcáchạtvànghaytungstenđượcphóngvềphíacáctếbàođích.ChúngxuyênquaváchtếbàovàphóngthíchcácphântửDNA

Mụctiêucủasúngbắngenthườnglàcalluscủacáctếbàothựcvậtgiốngnhausinhtrưởngtrongmôitrườnggeltrênđĩapetri.Saukhicáchạttungstenđãvachạmvàođĩa,gelvàcallusbịphávỡnhiều.TuynhiênmộtsốtếbàokhôngbịphávỡkhivachạmmạnhvàđãtiếpnhậncáchạttungstenđượcbaobọcDNAvàcuốicùngcácphântửDNAngoạilaiđãxâmnhậpvàhợpnhấtvàonhiễmsắcthểthựcvật.CáctếbàotừđĩapetriđượctậphợplạivàchọnlọccáctếbàođãhợpnhấtthànhcôngvàbiểuhiệnDNAngoạilaibằngcáckỹthuậthóasinhhiệnđạinhưsửdụnggenchọnlọcnốitiếpvàNorthernblots.Cáctếbàođơnđãchọnlọctừcalluscóthểđượcxửlývớimộtsốhormonethựcvậtnhưauxin,gibberelinvàmỗimộttếbàocóthểphânchia,biệthóathànhcáctếbàomô,cơquan,tếbàochuyênhóacủatoànbộcây.Câymớicónguồngốctừmộttếbàonảymầmthànhcôngcóthểmangcácđặctínhditruyềnmới.Phươngphápnàycóưuđiểmlàthaotácdễdàng,cóthểchuyểngenvàonhiềuloạitếbàovàmô,cáctếbàođượcbiếnnạpcótỉlệsốngsótcao,chophépđưacácgenvàotếbàoởvịtrímongmuốn Dovậynóđượcsửdụngrộngrãitrongnhiềulĩnhvực

1.2.3.Xungđiện

Kỹthuậtxungđiện(electroporation)làmộtphươngphápcơhọcđượcsửdụngđểđưacácphântửphâncựcvàotrongtếbàochủquamàngtếbào.Trongphươngphápnày,mộtxungđiệncaothếtrongkhoảnhkhắc(vàiphầnnghìngiây)cókhảnănglàmrốiloạncấutrúcmàngképphospholipid,tạoracáclỗthủngtạmthờichophépcácphântửDNAngoạilaitừmôitrườngxâmnhậpvàobêntrongtếbào

100.000v/

cm(thayđổitùytheokíchthướccủatếbào)trongvàiphầntriệugiâyđếnmộtphầnngàngiây.Xungđiệnnàylàmrốiloạnphospholipidképcủamàngtếbàovàtạoracáclỗtạmthời.Khảnăngđiệnquamàngtếbàocùnglúctănglên0,5-

1,0vvìvậycácphântửđãđượcnạpđiệnnàyđiquamàngtếbàothôngquacáclỗbằngcáchthứctươngtựnhưđiệndi

Hình1.2.3–Máyxunggenvàsơđồbốtrímạchcơbảncủamáyxungđiện

Khicácionđãnạpđiệnvàcácphântửđiquacáclỗ,màngtếbàophóngđiệnvàcáclỗnàyđónglạimộtcáchnhanhchóngvàphospolipidképphụchồilạicấutrúccũ.Lúcnàycácphântửmongmuốnđãởtrongtếbàovàchúngđượcsửdụngchocácnghiêncứutiếptheo

Phươngphápnàycóthểsửdụngđốivớitếbàothựcậtởdạngprotoplast Vớimộtsốcâymộtlámầmquantrọng(loàilúaphụJaponica,ngô,lúamì).Hiệuquảbiếnnạpcao

1.2.4.ChuyểngennhờvikhuẩnAgrobacterium

AgrobacteriumcókhảnăngxâmnhiễmtếbàothựcvậtbằngcáchchuyểnmộtđoạnDNAcủanóvàotếbàothựcvật.KhiDNAvikhuẩnđượchợpnhấtvớinhiễmsắcthểthựcvật,nósẽtấncôngvàohệthốngtổchứccủatếbàomộtcáchcóhiệuquảvàsửdụngnóđểđảmbảochosựsinhsôicủaquầnthểvikhuẩn.MặcdùhệthốngchuyểngengiántiếpnhờAgrobacteriumlàcóhiệuquảđốivớimộtsốloàinhưng

khôngphảitấtcảthựcvậtcóthểđượcbiếnnạpbằngconđườngnày.Ðặcbiệt,lớpmộtlámầmbaogồmcáccâyngũcốcchínhtrênthếgiớinhưlúa,lúamìvàngôlàkhôngđượcbiếnnạpdễdàngnhờA.tumefaciens.

GVHD:TạNgọcLy 10

B.GẠO

1.5.Gạo(Rice)

Gạolàmộtsảnphẩmlươngthựcthutừcâylúa.Hạtgạothườngcómàutrắng,nâuhoặcđỏthẫm,chứanhiềudinhdưỡng.Hạtgạochínhlànhâncủathócsaukhitáchbỏvỏtrấuvàcám.Gạolàlươngthựcphổbiểncủagầnmộtnửadânsốthếgiới

1.5.2.SảnxuấtlúagạoởViệtNam

ViệtNamcóhaivùngtrồnglúachínhlàđồngbằngsôngHồngởphíaBắcvàđồngbằngsôngCửuLongởmiềnNam.Hàngnămsảnlượngcủacảnướcđạt33-

34triệutấnthóc,trongđóchỉsửdụngkhoảng8triệutấn(tươngđương4triệutấngạosaukhixayxát)choxuấtkhẩu,cònlạilàtiêuthụtrongnướcvàbổsungdựtrữquốcgia

-ỞmiềnBắcmộtnămcóhaivụlúachính:vụchiêmvàvụmùa

-ỞmiềnNam,nôngdântrồngbavụmộtnăm:vụđôngxuân(cósảnlượngcao

nhấtvàthóccũngđạtchấtlượngtốtnhấtchoxuấtkhẩu),vụhèthuvàvụba.Dolũ

BộNôngnghiệpvàPháttriểnNôngthônlàbộchủquản,quảnlýviệcsảnxuấtlúagạocủaViệtNam

mộtloạigạobiếnđổiditruyềnmàuvàngcóchứatiềnsinhtốAvàmộtsốlượnglớnchấtsắtđư

ợcphátminh.Từnăm2000vàđếnnaycácviệnnghiêncứutrênthếgiớiđãtạođượchailoạilàGR1vàGR2

-GR1đượctạorakhichuyểngensinhtiềntốVitaminAtừcâyhoathủytiênvà

ErwiniauredovoravàogiốnglúaIndica

-GR2đượccảitiếntừGR1bằngcáchthaygensinhtiềntốVitaminAtừcâyhoathủytiênbằnggentừcâybắp.GR2sảnxuấtralượngtiềntốvitaminAcaogấp23lầnsovớiGR1

1.6.1.Tìnhhìnhpháttriểncủagạovàngtrênthếgiới.

Gạovàngđượcbắtđấutiếnhànhnghiêncứutừnăm1999.Đếnnăm2000thìGR1rađời

Vàongày27-3-05,mộtđộingũkhoahọcgiacủacôngtyHạtGiốngSyngentaởCambridge,AnhQuốc,đãtuyênbốkhámpháđượcloạigạovàngmới(GR2)chứalượngβ-

1.6.2.ÝnghĩacủaviệctạoraGạovàng(GoldenRice)

Ngườitadựtínhkhoảng100đến140triệutrẻemtrênthếgiớiđangbịthiếuvitaminA,gâyramùmắt,bệnhsởivàtửvong.ViệcnghiêncứutạothànhcônggiốnglúachoGạovàngcóthểcứuhàngtrămngàntrẻembịmùhàngnămvìthiếuvitamin

A

GạoVànglàsựkiệnlớnnhấtlàkhimàgiálươngthựcngàymộtcao,trênthịtrườnggiốnggạonàyđãxuấthiệnởIran2005,đangkhảonghiệmởTrungQuốc,PhilipinvànhiềunướcChâuÁkhác.TheodựbáoGạovàngsẽđượcthươngmạihóavàonăm2011làmộtsảnphẩmdinhdưỡngmớicótiềmnănglớnvềmặtkinhtế.HứahẹnmanglạimộtnguồnthunhậpkhổnglồchocácQuốcgiađangđầutưnghiêncứuvàđangdầnthànhcôngtrongđềtài“Goldenrice”này

Gạochuyểngengópphầnđảmbảoanninhlươngthựcvàxóabỏnạnđói

Gạovàngrađờimangýnghĩatolớnchothấysứcmạnhvàgiátrịứngdụngcủa

côngnghệsinhhọcđốivớiđờisốngconngười

CHUYỂNGENGẠOVÀNG

2.1.Đốitượngnghiêncứu:

SửdụngPhôinonvàhạtgạocácgiốnglúaTaipei309,IR64vàMTL250(Indica)cóđặcđiểmtốtvềnônghọc,chấtlượngđểthựchiệnbiếnđổigen

Cácnhàkhoahọcđãsửdụngphôicủahạtlúanuôicấymôtáisinhcâylúaphòngthínghiệmrồic

huyểngenbằngvikhuẩnAgrobacteriumtumefaciensđểđưatấtcảcácgenlạvàophôihạtlúasauđ

ó

Kiểmtrabiểuhiệncủagenquakiểmtrakiểuhình(hạtgạocómàuvàng),kiểmtratheophươngphápđánhgiácảmquanbằngmắtthường

KiểmtrasựxuấthiệncủacácgenchuyểntrongcâylúachuyểngenbằngphươngphápđiệndivàPCR

2.3.1.CơchếtạoGạovàng(GoldenRice)

β-caroten

Bảnthânhạtgạocóchứageranylgeranyldiphosphate(GGPP)mộttiềnchấtquantrọngtrongtiếntrìnhsinhtổnghợpβ-caroten.Nhưngcâylúathườngthìlạikhônghềchứaβ-

caroten,bằngchứnglàhạtgạothườngcómàutrongsuốtmàkhônghềcómàuvàngđặctrưngcủaβ-caroten.ĐểGGPPchuyểnhóathànhcácchấttrunggianrồichuyểnthànhβ-

carotenthìcầncócácEzimxúctáctươngứng,nhưngbảnthâncâylúalạikhôngcóchứacácgencónhiệmvụsinhtổnghợpracácenzimcầnthiếtđểxúctácchocácphảnứngchuyểnhóaGGPPthànβ-

caroten.Khichuyểncácđoạngenpsy,crtI,lcyvàotrongcâylúathìsẽtạoramộtsựthayđổirấtlớn Khiđó,genpsylàgenmãhóađểsinhtổnghợpraenzimphytoensynthasecónhiệmvụxúctácđểch uyểnhóaGGPP(20C)thànhphytoen(40C).TiếptheođoạngencrtImãhóađểsinhtổnghợpenzi

Trồnglúachuyểngenvàcholaivớigiốnglúađịaphương

B10

Trồngđạitràthusảnphẩmgạovàng

Trongcâylúabiếnđổigenngườitađưavàođểbiểuhiệnhaigenmãhóa,phytoenesynthase(ps y)vàlycopenecyclase(lcy)từcâyhoathủytiênvàngvàgenmãhóacarotoenesynthetase1(crt1) từvikhuẩnđấtErwiniauredovora.Nhưngngườitathấyrằngloạilúanàykhôngchonhiềutiềntố vitaminAnhưmongđợivìpsylàmgiảmhiệuquảtíchtụβ-

carotentrongnộinhũcủahạtgạo.Vìthếgenpsytừcâyhoathủytiênvàngđượcthaythếbằnggenp sytừngô.

Bước1:GiốnglúaTaipei309,IR64vàMTL250(Indica)đượctrồngtrongnhàkínhvớicácđi

ềukiệnmôitrườngtốiưu,đượcsinhtrưởngpháttriểntốt,đảmbảosạchbệnh.Ngườitachọnnhữngcâylúacóđặcđiểmtốt,chọnhạtchắcmẩy,bócvỏđểchọnphôitốtrồitiếnhànhbảoquảntrongmôitrườngvôtrùng

Hình2.3.3a–Câylúađượctrồngtrongcácđiềukiệnnhântạotốiưuđểlấynguyênliệu

chuyểngen

*Muốncó1lítmôitrườnglàmviệcMS

làbộkidđểtestnhanh),rồiđemủở560Ctrongmáyổnnhiệttrong30phútđểhoạthóaenzim.Bấmđồnghồđểcanhthờigian

PhầnANDsaukhitáchrađượctiếnhànhcắtđoạngencần(đoạngenctrI)bằngenzimEcoRI.T athunhậnđượcđoạngenctrIđểsửdụngtrongchuyểngenởcácbướcsau.

Bước4:Hoathủytiên(hoặcngô)đượctrồngtrongnhàkínhvớicácđiềukiệnmôitrườngtốiư

u,đảmbảosạchbệnh,đượcchọnlọcvớiđiềukiệncâysinhtrưởngpháttriểntốt,chohoacómàuvàngtươi.Ngườitachọnnhữngbônghoa(quảngô)đangtrongthờigianpháttriểnmạnhđểchiếtxuấ

tgen.Genpsyvàgenlyccủacácbônghoa(quả)nàyđượctiếnhànhtheocácgiaiđoạnnhưsau:

-Bỏ10gđákhôvàoxaynhuyễn,sauđócho8ghoathủytiên(hoặchạtngô),xaychođếnkhithànhbộtmịn

-20độtrongvòng6tiếng

huyểnvào2plasmidlàpCaCarvàpFun3.Trongđóhaigenpsy,crt1đượcchuyểnvàoplasmidpC aCar,gencònlạilàlcyđượcchuyểnvàomộtplasmidpFun3.

Hình2.3.3b–Plasmidchuyểngen(Đãđượcminhhọathànhđườngthẳng)

Bước6:CácplasmidđượcchuyểnvàohaiđĩapetrikhácnhaucónuôivikhuẩnAgrobacteriu

mtumefaciendòngmannopinetypeTiplasmid.Plasmidtựđộngchuyểnvàobêntrongtếbàovik

huẩn,nhờsựtăngsinhcủavikhuẩnchúngđượcnhânbảnvớisốlượnglớnvàđượcsửdùngtronggiaiđoạntiếptheo

Bước7,8:NuôicấyA.tumefactientrênmôitrườngcóchứamầmtáisinhcâylúađãđượcchuẩ

nbịởbước2.CácđoạngenngoạilaitừA.tumefactiensẽđượcchuyểnvàomầmtáisinhtừphôi.

Môitrườngđểnuôicấyđượcphachếthửnghiệmnhưbảngdướiđây,thựcnghiệm

sẽlựachọnramôitrườngtốiưuđểsửdụngtrongquátrìnhchuyểngen

KếtquảthựcnghiệmcủaViệnlúađồngbằngsôngCửuLongchobiếttrongsốcácmôitrườngđượcnghiêncứunóitrênthìmôitrườngMSReg3làmôitrườngtốiưunhấtchoquátrìnhchuyểngen

bằngA.tumefactien.

+TronggiaiđoạntiếptheovikhuẩnmanggenchuyểnđượcđưavàonuôicấytrongmôitrườngcóchứaphôicủahạtlúaIndicađãđượcchuẩnbịởtrên.Vikhuẩn

Cáchạtlúathuđượcsẽđượcđưađikiểmtrakếtquảchuyểngenvàkiểmtratínhantoàntrướckhitrởthànhsảnphẩmchoconngườisửdụng

tơpCaCarvàcắtđoạnvớiKpnI(mộtđiểmcắt)đểxácđịnhsốbản(copy).ĐốivớiDNAcủacácdònglúachuyểnnạpbằngvéctơpFun3đượccắtđoạnvớiEcoRIvàHindIII(haiđiểmcắt)đểxácđịnhsựhiệndiệncủagenpsyhoặccrtIvàcắtvớiKpnI(mộtđiểmcắt)đểxácđịnhsốbản.

DNAcắtđoạnđượcchạyđiệndiqua0,8%agarosegeltrướckhichuyểnbằngmaodẫnvàcốđịnhtrênmàngnylông(Hybond-N+,Amersham).GenpsyvàcrtIđược

đánhdấubằngDIG(Boeheringer,Rotkreuz,Switzerl),đượcdùnglàmmẫudò(probe).Lai,rửavàpháthiệngenđượcthựchiệntheophươngphápcủaWiinnvàctv.(1996).

Phần3 KẾTLUẬN

Câytrồngchuyểngenđãmanglạinhiềulờiíchchoconngườivàđặcbiệtlàsảnphẩmgạovàng,mộtlựachọnmớichocácquốcgianghèo.Đâylàmộtthànhcồnglớncủanêncôngnghệsinhhọccủathếgiới.Giátrịcủacácsảnphẩmchuyểngencầnnhiềuthờigianđểthẩmđịnh,nhưngnhữnggìchúngđãmanglạichochúngtahiệnnayđãkhôngthểphủnhậnrằngthựcvậtchuyểngencóýnghĩatíchcựcvàtolớntrongđờisốngconngười.Gạovàngsẽlàmộtniềmhyvọngrấtlớnchotrẻemphụnữvànhiềuthànhphầnkháctrongxãhội.ViệtNamcũngđãthànhcôngtrongnghiêncứuvềloàiGMmớinày.Chúngtahyvọngmộtngàykhôngxagạovàngsẽlànguồnlươngthựcchocảthếgiớivàđósẽlàmộttươnglaimàchúngtakhôngcònphảilolắngvềkhủnghoảnglươngthực

15.http://www.ebook.edu.vn/?page=1.18&view=1501

LỜICẢMƠN 1

ĐẶTVẤNĐỀ 2

Phần1: 3

TỔNGQUAN 3

A.CHUYỂNGENTHỰCVẬT 3

1.1.Kháiniệmchuyểngenthựcvật 3

1.2.Cácphươngphápchuyểngenthựcvật 3

1.2.1.Vitiêm 3

1.2.2.Súngbắngen 5

1.2.3.Xungđiện 6

1.2.4.ChuyểngennhờvikhuẩnAgrobacterium 7

1.3.Mụcđích,ýnghĩa,vàmộtsốthànhtựucủachuyểngenthựcvật 8

1.3.1.Mụcđíchcủachuyểngenthựcvật 8

1.3.2.Ýnghĩacủachuyểngenthựcvật 8

1.3.3.Mộtsốthànhtựucủachuyểngenthựcvật 9

1.4.Nhữngnguycơtừchuyểngenthựcvật 9

B.GẠO 10

1.5.Gạo(Rice) 10

1.5.1.Nguồngốc 10

1.5.2.SảnxuấtlúagạoởViệtNam 10

1.6.Gạovàng(GoldenRice) 11

1.6.1.Tìnhhìnhpháttriểncủagạovàngtrênthếgiới 11

1.6.2.ÝnghĩacủaviệctạoraGạovàng(GoldenRice) 12

Phần2: 13

CHUYỂNGENGẠOVÀNG 13

2.1.Đốitượngnghiêncứu: 13

2.2.Phươngphápnghiêncứu 13

2.3.QuytrìnhkỹthuậtchuyểngenGạovàng(GoldenRice) 14

2.3.1.CơchếtạoGạovàng(GoldenRice) 14

2.3.2.Quytrìnhkỹthuật 15

2.3.3.Thuyếtminhquytrình 16

2.5.Kiểmtrakếtquảchuyểngenβ-caroten 23

2.5.1.Kiểmtrabằngcảmquan 23

2.5.1.Kiểmtrabằngkỹthuậtphântíchphântử 23

2.5.1.1.SửdụngkỹthuậtPCRpháthiệnsựcómặtcủacácgenpsy,crt,lcy 23

2.5.1.2.TríchDNAvàphântíchSouthern 24

Phần3 26

KẾTLUẬN 26

TÀILIỆUTHAMKHẢO 27