Mô hình đánh giá hoạt tính tái tạo da

Mô hình đánh giá hoạt tínhtái tạo da Mô hình đánh giá hoạt tínhtái tạo da Mô hình đánh giá hoạt tínhtái tạo da Mô hình đánh giá hoạt tínhtái tạo da Mô hình đánh giá hoạt tínhtái tạo da Mô hình đánh giá hoạt tínhtái tạo da Mô hình đánh giá hoạt tínhtái tạo da

MÔ HÌNH ĐÁNH GIÁ

HOẠT TÍNH TÁI TẠO DA

Môn học: Các phương pháp phát hiện và phát triển

thuốc

PGS.TS : Nguyễn Thị Thanh

Mai

MÔ HÌNH ĐÁNH GIÁ

01 03

02 04

Tái tạo da

là gì?

• Các quá trình tự nhiên của cơ thể

để phục hồi mô cũ hoặc bị hư tổn

• Thúc đẩy sự tăng trưởng các tế bào da mới tự nhiên, khỏe mạnh

1

Cơ chế chữa lành vết thương

Giai đoạn tăng sinh tế bào

- Các tế bào chính tham gia quá trình

này bao gồm:tiểu cầu,bạch cầu

trung tính đại thực bào

- Bổ sung các tế bào viêm, hình thành

nguyên bào sợi và tế bào nội mô.

- Các tế bào viêm do tiểu cầu tiết ra

và vết thương được làm sạch bằng

thực bào

- Giai đoạn tăng sinh gồm 3 giai đoạn chính: Giai đoạn tái cấu trúc, lên mô hạt, biểu mô hóa

- Giai đoạn lên mô hạt: hình thành các mạch máu mới nhờ sự tăng sinh của tế bào nội mô kết hợp với nguyên bào sợi.

- Qúa trình tái tạo biểu mô: sắp xếp các ngoại gian bào nhằm liên kết vết thương

- Các thành phần chính tham gia gồm đại thực bào

và nguyên bào sợi.

- Giai đoạn tái tạo hình thành trong suốt quá tình

tổ chức các ngoại gian bào mới do cơ nguyên bào sợi thực hiện.

- Qúa trình sửa đổi phần trăm colagen I và III.sau đó nguyên bào sợi sẽ đươc phân hủy, tổng hợp các

Mục tiêu đề tài

2

• Protein đại phân tử tự nhiên có

• Một loại dẫn xuất deacetylated của chitin, là polymer tự nhiên, không độc hại, không phân hủy sinh học.

• Kháng khuẩn, có tiềm năng trong việc sửa chữa vết thương.

• Tăng cường sự di cư của bạch cầu đa nhân.

Giới thiệu (serisin, chitosan, kén lụa)

3

CHITOSAN

• Kén lụa antheraea mylitta có trong tự nhiên.

• Có đặc tính chống oxy hóa và kháng khuẩn tốt.

Giới thiệu (serisin, chitosan, kén lụa)

3

KÉN LỤA

Thực

nghiệm

4

Lấy phần nổi trên

Chitosan(CS):Sericin(SS) Hydrogels

Phối trộn Sericin (2% w/v) và Chitosan (2% w/v trong 2% w/v axit

axetic) theo tỷ lệ như bảng

4.2 Chế tạo hydrogels

4.3 in vitro

Hydrogels Hydrogels

trung hòa

Rửa với alcohol (30% -

100%) NaOH 1N

Rửa PBS

pH 7,4

Ủ trong DMEM

Hydrogels

đã xử lí

Ủ qua đêm

sợi da

Ủ 24 tiếng

DMEM của Dulbecco

Dinh dưỡng F12 của Ham (1:1) và DMEM (glucose cao)  tương ứng ở 37°C trong bầu không khí vô trùng, ẩm ướt với 5% CO2  bổ sung huyết thanh bò

Hai dòng

tế bào

Ủ trong tối

37 oC 4h

Thu tinh thể

và hòa tan trong DMSO

tế bào sống chết

Sử dụng bộ phân lập RNA tổng số (Nucleopore) và phiên mã thành cDNA

Bộ tổng hợp cDNA sợi đầu tiên của Thermo Scientific

Theo tiêu chuẩn

Khuếch đạ

i

Cách ước tính cường độ tương đối

so với gen (actin) thông qua phần mềm Image J

Sử dụng primers đặc hiệu

4.4 in vivo

4.4 in vivo

Các mô da

thu được Biểu hiện gen

Phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược bán định lượng (RT-PCR)

 Gen GAPDH được sử dụng để bình thường hóa nghiên cứu biểu hiện

 Các mặt cắt ngang của hydrogels (được thu thập sau 7 và 28 ngày cấy ghép) đã được phân tích dưới kính hiển vi điện tử quét để quan sát sự

KẾT QUẢ &

ĐÁNH GIÁ

5

5.1 in vitro

5.1 in vitro

Hình 3 Phân tích định lượng mô hình đồng nuôi cấy tế bào trong ống

5.1 in vitro

5.2 in vivo

Hình 5a-b Nghiên cứu in vivo: Ước tính định lượng các cytokin viêm (a) IL-1β và

5.2 in vivo

Hình 5 (c) Phân tích các cytokin chống viêm (IL-10) và các cytokin chống viêm

5.2 in vivo

Hình 6 (a) Quan sát sự xâm nhập của các tế bào động vật (mũi tên màu vàng)

5.2 in vivo

Kết luận

 Các hydrogel được chế tạo của sericin – chitosan tăng cường sự gắn

bó, tăng sinh và di chuyển của các tế bào da (nguyên bào sợi và keratinocytes) dẫn đến sự hình thành da hai lớp như cấu trúc

 Sự hiện diện của sericin tăng cường sản xuất collagen và ma trận metalloproteinase tạo thành ma trận ngoại bào hỗ trợ sự phát triển của

mô da

 Phân tích in vitro và in vivo cho thấy hydrogel dựa trên sericin tương thích sinh học, không viêm và thúc đẩy tái tạo mô da

Kết luận

Tài liệu tham khảo

• https://segura.pratt.duke.edu/research/skin-regeneration

• Sapru, Sunaina Das, Subhayan Mandal, Mahitosh Ghosh, Ananta K.Kundu,

Subhas C Nonmulberry silk protein sericin blend hydrogels for skin

tissue regeneration - in vitro and in vivo 2019 Vol 137 pages

545-553.

• Joshi, M.Purwar, R.Wazed Ali, S.Rajendran Antimicrobial Textiles for

Health and Hygiene Applications Based on Eco-Friendly Natural

Tài liệu tham khảo

Thank you

for listening!

Thank you

for listening!