Ảnh hưởng của kim loại nặng đối với sự phát triển của vi khuẩn, đặc tính sinh hóa và tính nhạy cảm với kháng sinh

ẢNH HƯỞNG CỦA KIM LOẠI NẶNG ĐỐI VỚI SỰ PHÁT TRIỂN CỦA VI KHUẨN, ĐẶC TÍNH SINH HÓA VÀ TÍNH NHẠY CẢM VỚI KHÁNG SINH Kim loại nặng là các nguyên tố kim loại xuất hiện tự nhiên và có trọng lượng nguyên tử.

ẢNH HƯỞNG CỦA KIM LOẠI NẶNG ĐỐI VỚI SỰ PHÁT TRIỂN CỦA VI KHUẨN, ĐẶC TÍNH SINH HÓA VÀ TÍNH NHẠY CẢM VỚI KHÁNG

SINH

Kim loại nặng là các nguyên tố kim loại xuất hiện tự nhiên và có trọng lượng nguyên tử cao và mật độ lớn hơn năm lần so với mật độ của nước Một số nghiên cứu đã chứng minh rằng ô nhiễm kim loại trong môi trường tự nhiên có thể đóng một vai trò quan trọng trong sự phát triển và lan rộng của tình trạng kháng kháng sinh Đây là mối quan tâm đặc biệt, vì kim loại nặng thường xuất hiện ở mức cao hơn so với thuốc chống vi trùng được sản xuất trong dược phẩm Ngoài ra, bản chất tích lũy sinh học và không phân hủy sinh học của kim loại nặng có thể dẫn đến áp lực lựa chọn kháng kháng sinh trong thời gian dài Vì vậy, nghiên cứu này đánh giá ảnh hưởng của các muối Đồng, Coban, Cadmium, Kẽm và Chì đến sự

sinh trưởng, đặc tính sinh hóa và tính nhạy cảm với kháng sinh của Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosavà Staphylococcus aureus đối với các loại thuốc

chống vi trùng thường được sử dụng Các vi khuẩn được chọn đã tiếp xúc với các nồng độ khác nhau của muối kim loại nặng từ 1 ppm đến 1000 ppm, sau đó sự phát triển được đo bằng máy đo quang phổ Ảnh hưởng đối với các phản ứng sinh hóa

và tính nhạy cảm với kháng sinh cũng đã được kiểm tra bằng cách sử dụng các xét nghiệm sinh hóa thông thường và phương pháp khuếch tán đĩa Kirby-Bauer tương ứng Các kim loại nặng khác nhau ảnh hưởng khác nhau đến sự phát triển của từng

vi sinh vật Mặc dù vậy, sự phát triển của E coli, P aeruginosa và S aureus được

quan sát là tỷ lệ nghịch với nồng độ của các kim loại nặng được sử dụng Sau khi

tiếp xúc với kim loại nặng, E coli và S aureuskhông có thay đổi về tính chất sinh hóa của chúng nhưng P aeruginosa cho kết quả urease dương tính trái với đối chứng E coli phát triển đề kháng với Levofloxacin, Meropenem và Tetracycline trong khi S aureus kháng Azithromycin và Gentamicin và P aeruginosachỉ phát

triển đề kháng với Meropenem Những kết quả này xác nhận tác động bất lợi của kim loại nặng đối với sự phát triển của vi khuẩn và tiết lộ rằng kim loại nặng có thể gây ra những thay đổi trong một số đặc tính sinh hóa của vi khuẩn tạo ra bất kỳ đặc tính nào trong số này trong điều kiện phát triển căng thẳng Nghiên cứu này cũng

hỗ trợ những phát hiện rằng kim loại nặng tăng cường sự phát triển của tính kháng kháng sinh ở các chủng vi khuẩn nhạy cảm với kháng sinh Do đó, nghiên cứu này cung cấp cái nhìn sâu sắc về tình trạng có thể xảy ra của sự gia tăng kháng thuốc chống vi trùng do kim loại nặng gây ra ở các khu vực bị ô nhiễm kim loại nặng

1 Giới thiệu

Kim loại nặng là các nguyên tố kim loại xuất hiện tự nhiên và có trọng lượng nguyên tử cao và mật độ lớn hơn năm lần so với mật độ của nước1 Chúng bao gồm nhưng không giới hạn ở Cadmium, Đồng, Chì, Kẽm, Coban, Thủy ngân, Niken và Crom2 Chúng tồn tại trong môi trường thông qua các quá trình phong hóa tự nhiên hoặc các phản ứng hóa học như phản ứng oxi hóa khử, phản ứng axit/ bazơ và sự thay đổi nồng độ pH xảy ra trong đất và nước3 4 Kim loại nặng cũng được bổ sung thông qua các nguồn nhân tạo như khai thác mỏ, nông nghiệp (cả trồng trọt và chăn nuôi), xả nước thải từ các ngành công nghiệp và hộ gia đình và những kim loại này có nhiều khả dụng sinh học hơn so với các kim loại xuất hiện

tự nhiên do đó gây ra một vấn đề nghiêm trọng trên toàn thế giới5

Trong các hệ sinh thái môi trường, có sự tương tác giữa các chất gây ô nhiễm kim loại nặng và các vi sinh vật cư trú ở đó Một lượng nhỏ các kim loại này như Magie (Mg), Niken (Ni), Crom (Cr3+), Đồng (Cu), Canxi (Ca), Coban (Co), Mangan (Mn), Natri (Na) và Kẽm (Zn) ) cần thiết cho các chức năng trao đổi chất

và oxi hóa khử nhưng có thể gây độc ở nồng độ cao hơn6 Các chất khác như Nhôm (Al), Chì (Pb), Cadmium (Cd), Vàng (Au), Thủy ngân (Hg) và Bạc (Ag) thường không có vai trò sinh học và do đó có thể gây độc cho vi sinh vật và các sinh vật sống khác.7 8 9 Trong các hệ thống sinh học, kim loại nặng tương tác với các thành phần tế bào như màng tế bào, axit deoxyribonucleic (DNA), protein nhân

và một số enzym tham gia vào quá trình trao đổi chất, giải độc và sửa chữa tổn thương.10 Những tương tác này đôi khi dẫn đến chết theo chương trình hoặc chết

tế bào10 , 11 , 12 Điều này cuối cùng đã dẫn đến việc sử dụng các hợp chất kim loại làm chất chống vi trùng trong một số thiết bị y tế như ống thông và các sản phẩm y

tế khác.13

Tuy nhiên, vi khuẩn có xu hướng rất nhạy cảm với ô nhiễm kim loại và phát triển nhiều cơ chế kháng thuốc nội tại hoặc có được do đột biến nhiễm sắc thể hoặc thông qua các vật liệu di truyền có thể chuyển giao được.14 Các cơ chế đề kháng này bao gồm sửa đổi và vô hiệu hóa các tác nhân trị liệu, biểu hiện quá mức của bơm đẩy ra ngoài, thay đổi các thụ thể của vi khuẩn và sử dụng phản ứng thích ứng

vỏ tế bào không thấm nước để thúc đẩy sự sống sót trong môi trường khắc nghiệt.15 , 16 Do đó, chúng rất giống với các cơ chế kháng kháng sinh, gây ra mối lo ngại lớn về việc kim loại nặng chọn lọc gián tiếp để kháng kháng sinh bằng cách đồng chọn lọc Quá trình chọn lọc gián tiếp này xảy ra do sự kết hợp của các cơ chế đề kháng chống lại các tác nhân kháng vi sinh vật và kim loại nặng Chúng có thể được kết hợp về mặt sinh lý (kháng chéo) hoặc di truyền (đồng kháng)14

Một số nghiên cứu cũng đã chứng minh rằng ô nhiễm kim loại trong môi trường tự nhiên có thể đóng một vai trò quan trọng trong sự phát triển và lan truyền kháng kháng sinh (AMR)17 , 18 Đây là mối quan tâm đặc biệt, vì kim loại nặng thường xuất hiện ở mức cao hơn so với thuốc chống vi trùng được sản xuất dược phẩm19 và kết quả là bản chất tích lũy sinh học và không phân hủy sinh học của kim loại nặng có thể dẫn đến áp lực lựa chọn AMR trong dài hạn20 , 21

Do đó, nghiên cứu trong ống nghiệm này tìm cách phân tích tác động của các nồng

độ khác nhau của Đồng, Coban, Cadmium, Kẽm và Chì được chọn từ danh sách các kim loại được coi là ngày càng được công nhận là chất chống vi trùng22 về sự

phát triển của vi sinh vật, đặc tính sinh hóa và tính nhạy cảm với kháng sinh ở E coli ATCC 25922, P aeruginosa ATCC 27853 và S aureus ATCC 25923 Những

vi sinh vật này là chủng kiểm soát của một số mầm bệnh ưu tiên kháng kháng sinh của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO)23 Bộ sưu tập Văn hóa Kiểu Mỹ (ATCC) đã được sử dụng vì tất cả các đặc tính sinh hóa đã được biết đến và bất kỳ thay đổi nào trong các đặc tính này có thể dễ dàng được quy cho sự hiện diện của kim loại nặng trong môi trường tăng trưởng in-vitro Do đó, nghiên cứu này đưa ra cái nhìn sâu sắc mang tính dự đoán về sự đa dạng của vi sinh vật và sự gia tăng kháng thuốc chống vi trùng ở các khu vực bị ô nhiễm kim loại nặng

2 Vật liệu và phương pháp

Các chủng đối chứng của E coli ATCC 25922, P aeruginosa ATCC 27853 và S aureus ATCC 25923 được lấy từ các lọ bảo quản tại Trung tâm Nghiên cứu Bệnh

Nhiệt đới (TDRC) ở Ndola, Zambia và được sàng lọc bằng các kỹ thuật xác định vi sinh vật cơ bản để xác nhận vi khuẩn Bốn đến năm khuẩn lạc giống hệt nhau của mỗi vi sinh vật đã được xác nhận sau đó được chọn từ các đĩa nuôi cấy (Thạch máu

và Thạch MacConkey) và được cấy vào Nước muối thường điều chỉnh độ đục theo tiêu chuẩn 0,5 McFarland để tạo ra dung dịch cấy vi khuẩn

Năm muối kim loại nặng; Coban (ii) nitrat hexahydrat [Co(NO 3 ) 2 6H 2 O], Đồng (ii) monohydrat axetat [Cu(CH 3 COO) 2 H 2 O], Chì (ii) axetat trihydrat [Pb(CH 3 COO) 2 3H 2 O], Kẽm axetat dihydrat [Zn(CH 3 COO) 2 2H 2 O] và Cadmium axetat dihydrat [Cd(CH 3 COO) 2 2H 2O] đã được sử dụng để tạo ra nồng độ 1000 ppm Điều này được thực hiện bằng cách hòa tan một lượng tính toán của mỗi muối kim loại vào 1000 ml nước cất vô trùng Lượng muối kim loại được xác định bởi;

Do đó, 4,9385 g Co(NO 3 ) 2 6H 2 O, 3,1418 g Cu(CH 3 COO) 2 H 2 O, 1,8307 g Pb(CH 3 COO) 2 3H 2 O, 3,3572 g Zn (CH 3 COO) 2 2H 2 O và 2,3710 g Cd(CH 3 COO) 2 2H 2 O mỗi loại được hòa tan trong 1000 ml nước cất vô trùng để tạo ra nồng độ 1000 ppm được coi là dung dịch gốc Từ các dung dịch gốc kim loại nặng, tiến hành pha loãng nối tiếp để tạo ra các nồng độ 100 ppm, 10 ppm và 1 ppm24

5 ml của mỗi nồng độ trong số bốn nồng độ của mỗi muối kim loại được hút vào các ống falcon vô trùng, trong đó 5 ml nước peptone (nguồn chất dinh dưỡng) được thêm vào để đảm bảo lượng chất dinh dưỡng và kim loại nặng bằng nhau cho tất cả các vi sinh vật Đối với đối chứng (ký hiệu là PW + NS), 5 ml nước muối sinh lý được thêm vào 5 ml nước peptone trong các ống falcon Giao thức này là

một phiên bản thay đổi của giao thức được sử dụng bởi Rao et al 25 Tất cả các môi trường nuôi cấy đã được chuẩn bị và phân phối theo hướng dẫn của nhà sản xuất (Oxoid, Vương quốc Anh) và các thử nghiệm kiểm soát chất lượng và vô trùng đã được thực hiện trước khi sử dụng

2.1 Sự tiếp xúc của E coli , P aeruginosa và S aureus với các nồng độ kim

loại nặng khác nhau

Một vòng chất cấy được cấy vào từng ống chứa hỗn hợp kim loại nặng và chất dinh dưỡng và độ hấp thụ ban đầu (mật độ quang học) được đo bằng máy đo quang phổ ở bước sóng 600 nm Các ống này sau đó được ủ ở 37°C trong 24 giờ, sau đó

đo độ hấp thụ cuối cùng25 Sau đó, lấy một vòng chất cấy từ các ống đã ủ bằng cách sử dụng vòng dây đã khử trùng và cấy lên môi trường thạch MacConkey đối

với E coli và P aeruginosa và Blood agar đối với S aureus để điều tra khả năng

sống sót của vi khuẩn sau 24 giờ tiếp xúc với kim loại nặng

2.2 Xét nghiệm sinh hóa

Sau 24 giờ ủ, các xét nghiệm sinh hóa thông thường được sử dụng thường xuyên

để xác định vi khuẩn lâm sàng đã được sử dụng26

Đối với E coli và P aeruginosa , một khuẩn lạc thuần khiết được phân lập của

mỗi sinh vật được chọn một cách vô trùng từ mỗi đĩa thạch MacConkey và được cấy vào Triple Sugar Iron (TSI), Lysine Iron Agar (LIA), Sulfur Indole and Motility (SIM), Urease và môi trường Citrate Tất cả các ống nuôi cấy sau đó được

ủ ở 37°C trong 24 giờ, sau đó đọc và ghi lại kết quả Thuốc thử oxidase được

chuẩn bị theo hướng dẫn của nhà sản xuất và được sử dụng để thực hiện xét

nghiệm oxidase trên vi khuẩn E coli và P aeruginosa đã tiếp xúc 26

Đối với S aureus, một khuẩn lạc thuần khiết đã phân lập được chọn một cách vô

trùng từ mỗi đĩa Blood Agar và được cấy vào Mannitol Salt Agar (MSA) và ủ ở 37°C trong 24 giờ Các xét nghiệm catalase và coagulase cũng được thực hiện26

2.3 Thử nghiệm độ nhạy cảm với kháng sinh

Thử nghiệm độ nhạy cảm với kháng sinh (AST) được thực hiện bằng phương pháp khuếch tán đĩa Kirby-Bauer27 và diễn giải kết quả dựa trên hướng dẫn của Viện Tiêu chuẩn Phòng thí nghiệm Lâm sàng (CLSI)28 Các chất chống vi trùng thường được sử dụng (Oxoid, UK) đã được sử dụng Chúng được lựa chọn từ các nhóm kháng sinh dễ kháng thuốc bao gồm β Lactams, Aminoglycosides, Quinolones, Tetracycline và Macrolides Do đó, danh sách các loại thuốc chống vi trùng được

sử dụng bao gồm Ampicillin (10 μg), Ceftazidime (30 μg), Meropenem (10 μg),g), Ceftazidime (30 μg), Ceftazidime (30 μg), Meropenem (10 μg),g), Meropenem (10 μg), Ceftazidime (30 μg), Meropenem (10 μg),g), Levofloxacin (5 μg), Ceftazidime (30 μg), Meropenem (10 μg),g) và Tetracycline (30 μg), Ceftazidime (30 μg), Meropenem (10 μg),g), Gentamicin (10 μg), Ceftazidime (30 μg), Meropenem (10 μg),g) và Azithromycin (15 μg), Ceftazidime (30 μg), Meropenem (10 μg),g) (Oxoid, Vương quốc Anh) Kỹ thuật huyền phù khuẩn lạc trực tiếp được sử

dụng bằng cách đình chỉ 4-5 khuẩn lạc E coli , P aeruginosa và S aureus trong 5

mL nước muối sinh lý 0,85% (w/v) mỗi loại và điều chỉnh độ mờ nhìn thấy được của dịch cấy thành 0,5 McFarland Tiêu chuẩn (1,5 X 10 8CFU/ml) Một tăm bông

vô trùng được nhúng vào huyền phù khuẩn lạc và sau đó quét đều lên bề mặt của các đĩa thạch Mueller Hinton (MH) (HiMedia) Các đĩa giấy kháng sinh được rải lên các đĩa thạch MH như đã nêu trong Bảng 1 Các đĩa được để khô trong 20 phút trước khi được ủ ở 37°C trong 18-24 giờ, sau đó đường kính vùng được đo và giải thích bằng cách sử dụng các điểm phá vỡ tiêu chuẩn bằng cách sử dụng hướng dẫn CLSI28 là kháng, trung gian hoặc mẫn cảm

 Bảng 1 Các loại kháng sinh cụ thể và nồng độ của chúng được sử dụng cho AST trên từng vi sinh vật

3 Kết quả và thảo luận

3.1 Ảnh hưởng của kim loại nặng đến sự phát triển của E coli, P.

aeruginosa và S aureus

Mật độ quang học (độ hấp thụ) tăng lên trong tất cả các ống giống như đối chứng

(PW + NS) Tuy nhiên, sự phát triển của E coli, P aeruginosa và S aureus được

quan sát là tỷ lệ nghịch với nồng độ của các kim loại nặng được sử dụng Điều này được rút ra từ sự khác biệt thấp hơn giữa độ hấp thụ cuối cùng và ban đầu ở các sinh vật tiếp xúc với kim loại nặng so với đối chứng như trong Bảng 2 bên dưới

 Bảng 2 Sự phát triển của vi sinh vật sau 24 giờ tiếp xúc với kim loại nặng

Những kết quả này xác nhận tác động độc hại của kim loại nặng đối với vi sinh vật như báo cáo của các nhà nghiên cứu khác29 , 30 Kim loại nặng tạo ra một môi trường căng thẳng cho sự phát triển của vi sinh vật khi có trong nước dùng Điều này đã được quan sát ngay cả trong các ống không có sự phát triển trên các đĩa nuôi cấy nhưng cho thấy độ hấp thụ tăng nhẹ Điều này kéo theo việc các vi sinh vật bắt đầu phát triển nhưng không thể sống sót do các kim loại nặng có trong nước dùng làm cho môi trường trở nên độc hại

Các kim loại nặng khác nhau ảnh hưởng khác nhau đến sự phát triển của từng vi sinh vật riêng lẻ, dẫn đến một số nồng độ của kim loại nặng ức chế hoàn toàn sự phát triển của vi sinh vật như trong Hình 1

Tất cả các kim loại đều giảm sự phát triển của E coli Tuy nhiên, coban là kim loại độc hại nhất đối với E coli vì nó ức chế hoàn toàn sự phát triển ở 100 ppm và

độc tính của nó có thể là do khả năng tạo ra các gốc hyperoxide31 Đồng,

Cadmium và Kẽm đều ức chế hoàn toàn sự phát triển của E coli ở 1000 ppm trong

khi Chì không ức chế hoàn toàn sự phát triển Vi khuẩn có xu hướng lắng đọng Chì dưới dạng muối photphat bằng cách sử dụng liên kết trong và ngoài tế bào của các ion Chì cùng với các bơm vận chuyển màng như một cách để thoát khỏi độc tính của các ion Chì tự do32 Điều này có thể giải thích hành vi của E coli và các vi

sinh vật khác trong canh trường nuôi cấy có chứa Chì Mặt khác, điều này hỗ trợ

những phát hiện của các nhà nghiên cứu khác31 rằng Chì không phải là chất cực độc đối với vi sinh vật



 Hình 1 Ảnh hưởng của các kim loại nặng khác nhau đến sự phát triển của

từng vi sinh vật

Đối với P aeruginosa , Đồng, Cobalt và Kẽm là những kim loại độc nhất và chúng

ức chế hoàn toàn sự phát triển ở 1000 ppm Đồng và Coban được biết là gây ra độc tính bằng cách sử dụng các gốc hyperoxide trong khi Kẽm sử dụng “liên kết thiol

và biến tính protein như những cách ảnh hưởng đến vi sinh vật14 , 31 Chì và

Cadmium cũng làm giảm sự phát triển của P aeruginosa nhưng không ức chế hoàn toàn Nhiều nhà nghiên cứu đã báo cáo P aeruginosa có khả năng kháng

Cadmium khi được phân lập từ các môi trường khác nhau Cơ chế chống chịu

mà P aeruginosa sử dụng để chống lại Cadmium là các bơm đẩy ra được tìm thấy

trong hệ thống vận chuyển ATPase loại P Điều này được rút ra từ các kết quả

nghiên cứu cho thấy rằng hệ thống CadA cho dòng chảy Cadmium là cơ chế được

sử dụng cho khả năng chống chịu Cadmium và là hệ thống kim loại nổi bật nhất15 , 33

Mặt khác, S aureus chỉ bị ức chế hoàn toàn bởi 1000 ppm Đồng Đặc tính triệt để

của Đồng làm cho nó rất độc hại Người ta cho rằng các gốc tự do và các sản phẩm không ổn định của các phản ứng enzym, làm gián đoạn quá trình thủy phân enzym

và phản ứng oxi hóa khử, cuối cùng dẫn đến chết tế bào31 Đây là phương thức

hoạt động mà Đồng sử dụng để ức chế sự phát triển của S aureus ở nồng độ 1000

ppm Coban, Cadmium, Kẽm và Chì không ức chế hoàn toàn sự phát triển của S aureus ở bất kỳ nồng độ nào vì sinh vật này được biết là sử dụng các cơ chế đề

kháng khác nhau để tránh nhiễm độc kim loại nặng Trong trường hợp này, các màng chặn được sử dụng để tạo ra khả năng kháng Kẽm trong khi quá trình giải độc Cadmium, Chì và Đồng được thực hiện bởi các ATPase liên kết các kim loại theo ái lực của các cấu trúc riêng lẻ34 S aureus thường được biết là tiến hóa các

bộ điều chỉnh tín hiệu cho phép nó thích nghi với môi trường sống thay đổi bằng cách điều chỉnh các phản ứng của tế bào vi khuẩn và biểu hiện các gen độc lực Nó cũng sử dụng sự hình thành màng sinh học để bảo vệ bản thân trước các điều kiện căng thẳng35 có thể giải thích cách S aureus phát triển ở hầu hết các nồng độ kim

loại nặng

3.2 Ảnh hưởng của kim loại nặng đến đặc tính sinh hóa của E coli, P.

aeruginosa và S aureus

Các kim loại nặng đang được nghiên cứu không ảnh hưởng đến các đặc tính sinh

hóa của E coli và S aureus Điều này được mô tả bằng các xét nghiệm sinh hóa

cho thấy không có sự khác biệt so với đặc tính kiểm soát Tuy nhiên, mặc dù

không có sự khác biệt trong các phản ứng sinh hóa giữa kiểm soát P aeruginosa

và P aeruginosa tiếp xúc với kim loại nặng trong môi trường TSI, LIA, Citrate và

SIM, nồng độ Đồng, Coban, Cadmium và Kẽm khác nhau tạo ra kết quả urease dương tính, trái ngược với của điều khiển như trong Hình 2 và Hình 3 bên dưới



 Hình 2 Phản ứng sinh hóa kiểm soát P aeruginosa trong TSI (a), LIA (b),

Urease (c), Citrate (d) và SIM (e)



 Hình 3 Phản ứng sinh hóa của P aeruginosa tiếp xúc với kim loại

nặng trong TSI (a), LIA (b), Urease (c), Citrate (d) và SIM (e)

Một nghiên cứu trong ống nghiệm đã xác nhận các phép đo hoạt tính urease của P aeruginosa bằng Phương pháp khối phổ tỷ lệ đồng vị bằng cách sử dụng các kỹ thuật tương tự như các nghiên cứu trước đây về M tuberculosis 36 Ngoài ra, một nghiên cứu bằng chứng về khái niệm để phát hiện vi khuẩn sản xuất urease trong

phổi đã chọn những bệnh nhân Xơ nang có sự xâm nhập của P aeruginosa đã

được xác nhận vì enzyme urease là yếu tố độc lực được biểu hiện rộng rãi của

nhiều mầm bệnh vi khuẩn và nấm, bao gồm cả P aeruginosa 37 Các nghiên cứu

này cho thấy khả năng P aeruginosa biểu hiện urease như một yếu tố độc lực, do

đó dẫn đến việc 1 ppm Cu, 10 và 100 ppm Co, 100 và 1000 ppm Cd và 10 ppm Zn gây ra sự biểu hiện của enzyme urease như một yếu tố độc lực

trong P .aeruginosa Tuy nhiên, điều này cần được nghiên cứu chi tiết để xác

nhận giả định này và để xác định cơ chế hoạt động chính xác của các nồng độ kim loại khác nhau dẫn đến việc sản xuất yếu tố độc lực này

Mặt khác, xét nghiệm urease dương tính ở P aeruginosa có thể là kết quả của việc

sử dụng peptone hoặc các protein khác và không nhất thiết phải tạo ra urease Điều này là do một trong những hạn chế của nền thạch urê là thời gian ủ kéo dài làm tăng độ pH do quá trình thủy phân protein và giải phóng dư lượng axit amin quá