Tiểu luận : Lấy mẫu và xử lý mẫu Đề tài Lấy mẫu và xử lý mẫu cúm gà H5N1     !"#$%&'())% *&'(+*$% Mục lục 1. Khái quát về cúm gà. 3 . Lấy mẫu bệnh phẩm trên gia cầm 2. Bệnh mắc phải khi nhiễm cúm gà . 4 . Lấy mẫu trên người nghi mắc bệnh 5 . Bảo quản và nguyên tắc đóng gói mẫu bệnh phẩm cúm 6. Phân lập virus trên phôi gà 7. Xử lý mẫu cúm gà bằng phương pháp phản ứng RT-PCR  &,*%,*%-./0.#1(%,234 5 * % %6% . * %- 7* %89 3 %+ 0: ;5 /04<.=/3>0%+3,? a. Khái quát bệnh cúm gia cầm  4= @%)60( =-0.0#A3!=5 )60(B-C0%6%D00CE? Virus cúm A  Họ : Orthomyxovirus  Kích thước: 80-100 nm  Hình cầu hoặc hình sợi  Màng bao lipid  Bộ gen : 8 phân đoạn  RNA A: Các dạng hình thái khác nhau của virus cúm A dưới kính hiển vi điện tử; B: Mô hình cấu tạo hạt virus cúm A C: Cấu trúc của phức hợp ribonucleoprotein RNP b.Tình hình dịch cúm trên thế giới và trong nước. Trên thế giới : Hình 1. Bản đồ các quốc gia xảy ra dịch cúm A/H5N1 (WHO, tính đến 15/09/2008). Phần bôi đậm là vùngdịch cúm xảy ra trên gia cầm; phần bôi nhạt là vùng dịch cúm chỉ xảy ra trên chim hoang dã. Trong nước : Dịch cúm gia cầm A/H5N1 bùng phát tại Việt Nam vào cuối tháng 12/2003 ở các tỉnh phía Bắc, sau đó đã nhanh chóng lan tới hầu hết các tỉnh/thành trong cả nước c. Mối quan hệ lây nhiễm và thích ứng các loài vật chủ của virus cúm A. F?<G*(.530H%I%6%.3>0%J %J*34%,K 2. Bệnh mắc phải khi nhiễm cúm gà H5N1 . a.Loài mắc và con đường lây nhiễm .  L-0:%*2M7%JC.300!83*%- 73090599*9N8.%6%3>0%J0O%J* 34%,K?  934%,K=P%1(0.%J34KQR (=*. %+0:;551(B%6%. =/ 3>0 %+ 3, S6%   T9 U O*9 .@ 3  ! 7)9VW140W9XXYK.W;*2W9Z8  [(%,.50\G*S'SH3)51+9  %]%+0:500I%^9 E%92_%_3G- 6  (!% *%+1`%I0O%(%0a34 %,%+0:4<4+000I%^=M= @%a%H?  !SbJ1(0c=CR?(%Id%1(B %6%=/3>0.S6%*9 /04<1C0:34%+ 0:2e=C0f3%g03h3 a.Loài mắc và con đường lây nhiễm b.Triệu chứng Trên gia cầm  !*J1(0c3!=CZ?  *%-1(4<0%*9%i E%d09=I0_/0%N9.';9 )=-3d092*0H069%5;a0C09%i E%2MBj? [...]... catheter, chia mẫu vào lđựng mẫu Tối ưu cho test nhanh (cúm người) b.Hướng dẫn cách lấy bệnh phẩm Dịch khí quản – Ngưng máy hút – Dùng bơm tiêm chứa 2 ml nước muối sinh lý bơm qua ống nội khí quản – Hút ngay ra bằng ống tiêm, nối lại máy thở ngay – Chuyển 1,5 ml dịch khí quản vào ống chứa sẵn 3 ml môi trường vận chuyển b.Hướng dẫn cách lấy bệnh phẩm 5.Bảo quản và nguyên tắc đóng gói mẫu bệnh phẩm cúm a.Bảo... Primer forward và primer reverse  Primer đặc hiệu H5N1: H5N1F và H5N1R  Đánh dấu các ống ly tâm nhỏ 0,5 ml A, B, C riêng rẽ Bước 2:Tiến hành RT-PCR ( 1 bước)  Chuẩn bị hỗn hợp PCR như sau : ­ Thêm 1 μl Primer H5N1F v à H5N1R vào ­ Dung dịch 5XRT­ PCR 10 μl các ống A, B,C ­ Dung dịch dNTPs10mM 2 μl ­ Thêm 2 μl RAN ki ểm tra v ào các ống A ­ Enzym hỗn hợp ­ Thêm 2 μl RNA đối chứng H5N1 vào ống ­ Chất... phía buồng hơi  Hút nước niệu mô bằng pipet, cho vào ống nghiệm 10ml  Bảo quản nước trứng đã thu hoặch được trong tủ ­70o C  Mẫu đã phân lập được kiểm tra bằng phản ứng HA Nếu âm tính có thể cấy chuyển trên phôi gà thêm 2­3 lần 7 .Xử lý mẫu cúm gà bằng phương pháp phản ứng RT-PCR Bước1: Chiết tách RAN từ bệnh phẩm bằng TRIZOL Cho 750 μl bệnh phẩm vào ống 1,5 ml Thêm 250 μl TRIZOL Giữ 5 phút ở nhiệt... đến 5 ngày trung bình là khoảng 3 ngày  Bệnh nhân sốt cao 39oc từ 1 đến 3 ngày  Bệnh nhân cảm thấy khó chịu, toàn thân ê ẩm, ho, sổ mũi nhức đầu, tiến tới khó thở rồi nghẹt thở, kèm theo các rối loạn về thính giác và thị giác  Chủng virus cúm A /H5N1 gây tỉ lệ tử vong rất cao cả ở gia cầm và trên người c.Phương thức chuẩn đoán chữa trị  Chẩn đoán huyết thanh học  Phản ứng ngưng kết hồng cầu gà (HA)... Giữ tại đó vài giây – Rút nhẹ nhàng xoáy tròn tăm bông trong quá trình rút ra – Sử dụng tăm bông khác để lấy mẫu mũi bên kia – Cho cả 2 tăm bông vào lọ đựng mẫu đã có sẵn môi trường vận chuyển Chất lượng chẩn đoán tốt hơn phết họng đối với cúm người b.Hướng dẫn cách lấy bệnh phẩm Dịch phết họng – Bệnh nhân há miệng – Dùng đè lưỡi đè lưỡi xuống – Dùng tăm bông miết mạnh khu vực 2 amidan và vách phía... lưỡi xuống – Dùng tăm bông miết mạnh khu vực 2 amidan và vách phía sau vòm hầu họng – Tránh chạm vào lưỡi – Cho tăm bông vào tuýp đựng mẫu có môi trường vận chuyển Chất lượng chẩn đoán tốt hơn phết mũi đối với cúm A /H5N1 Dịch mũi hầu (NPA) – Nối dụng cụ lấy mẫu với hệ thống hút chân không – Đưa catheter vào mũi theo hướng song song với vòm miệng, độ sâu bằng đường nối mũi, tai – Từ từ đưa catheter ra... c.Vận chuyển bệnh phẩm cúm Vận chuyển đường hàng không – Một đơn vị mẫu bệnh phẩm không vượt quá 1 lít (chất lỏng) hoặc 1 kg 4 lít(kg) (chất rắn) – Bệnh phẩm sau khi đóng gói không được vượt quá 4 lít (chất lỏng) hoặc 4kg (chất rắn) 1lít (kg) 6 Phân lập virus trên phôi gà  Phân lập virus từ bệnh phẩm bằng cách tiêm vào túi niệu phôi gà 9­11 ngày tuổi  Tiêm truyền trên phôi gà  Đặt trứng lên khay,... Khăn giấy virkon S và bình phun các ống nước dùng bị đổi màu hoặc có ­ Đèn đầu, nếu cần bổ sung ánh sáng cặn ­ BHI ống nước dùng hết hạn sau 18 tháng khi được lưu trữ ở nhiệt độ tủ lạnh b Quy trình lấy mẫu 4 Lấy mẫu trên người nghi mắc bệnh Tiêu chuẩn chất lượng mẫu bệnh phẩm  Đúng chủng loại – Bệnh phẩm chứa tế bào biểu mô đường hô hấp – Dịch tiết đường hô hấp  Đúng thời điểm – 3 ngày đầu của bệnh... rỉ Giữa lớp thứ nhất và lớp thứ hai có lớp lót và vật thấm nước Lớp ngoài cùng: đảm bảo chịu lực, chống va chạm Giữa lớp thứ hai và lớp ngoài cùng có 1 lớp đệm chống va đập b.Nguyên tắc đóng gói bệnh phẩm cúm A Đóng gói riêng biệt  Khi đựng nhiều mẫu trong lớp thứ hai: tách riêng mẫu, tránh tiếp xúc với nhau  Nhiệt độ bảo quản Tên loại bệnh phẩm  Gởi kèm phiếu xét nghiệm và phiếu điều tra  Ghi... thập mẫu  Kéo để cắt que bông  Đĩa Petri hoặc ly (cốc) vô trùng  Bơm kim tiêm cỡ 3­5­10 ml  Dây thắt tĩnh mạch (garot)  Ống nghiệm lấy máu đông và ống chứa huyết thanh  Pipette Pasteur hoặc ống nhỏ giọt vô trùng để tách huyết thanh  Nước muối sinh lý NaCl 0,85%  Túi nylon chứa các tube BP  Khăn giấy thấm mềm hoặc giấy vệ sinh b.Hướng dẫn cách lấy bệnh phẩm  Dịch phết mũi – Đưa tăm bông vào . Tiểu luận : Lấy mẫu và xử lý mẫu Đề tài  Lấy mẫu và xử lý mẫu cúm gà H5N1    . Khái quát về cúm gà. 3 . Lấy mẫu bệnh phẩm trên gia cầm 2. Bệnh mắc phải khi nhiễm cúm gà . 4 . Lấy mẫu trên người nghi mắc bệnh 5 . Bảo quản và nguyên