Cómo citar este artículo: Rito-Domingo, M., et al.. Hypophagic effect of urocortin in adrenalectomizedhttp://journals.iztacala.unam.mx/index.php/amta/ ARTÍCULO Melissa Rito-Domingoa , b,
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http://journals.iztacala.unam.mx/index.php/amta/
ARTÍCULO
Melissa Rito-Domingoa , b, Karina Cruz-Garcíaa, Rodrigo Erick Escartín-Péreza,
Juan Manuel Mancilla-Díaza , b y Verónica Elsa López-Alonsoa , ∗
aLaboratorio de Psicobiología de la Alimentación, Proyecto de Investigación en Nutrición, Facultad de Estudios Superiores Iztacala, Universidad Nacional Autónoma de México, Tlalnepantla, Estado de México, México
bPosgrado en Ciencias Biológicas, Universidad Nacional Autónoma de México, Ciudad de México, México
KEYWORDS
Feedingbehavior;
Hypothalamic
paraventricular
nucleus;
CRH;
Adrenalectomy;
Behavioralsatiety
sequence
Abstract Theobjectiveofthisresearchwastoevaluatetheeffectofstimulationof recep-torsCRH2intheparaventricularnucleusofthehypothalamusonfoodintakeandexpression
ofbehavioralsatietysequence(BSS)inadrenalectomized rats.Eight independentgroups of Wistarratswereutilized;fouradrenalectomizedgroups(ADX)andfourwerefalsesurgery.All subjectswereimplantedwithacannulaintheparaventricularnucleusofthehypothalamusand wereadministeredwithoneofthefourtreatments:vehicle,urocortin-2(UCN2,CRH2agonist), antisauvagine-30(CRH2antagonist)orantisauvagine-30+UCN2(pretreatment).UCN2 adminis-trationreducedintakeofcarbohydratesandfatsinADXratsduetotheinterruptionoftheBSS
InratswithfalsesurgeryitdecreasedfatintakeduetotheadvancementoftheBSS Pretreat-ment preventedtheeffectsinducedbyUCN2inADX ratsbutnotinratswithfalse surgery TheseresultssuggestthatreceptorsCRH2modulatedintakeandBSSinADXrats,contributing withrelevantinformationfortheunderstandingoftheanorexicethiologyandthebehavioral patternassociatedtoit
©2016UniversidadNacionalAutónomadeMéxico,FacultaddeEstudiosSuperioresIztacala ThisisanopenaccessarticleundertheCCBY-NC-NDlicense(http://creativecommons.org/ licenses/by-nc-nd/4.0/)
∗Autoraparacorrespondencia.
Correo electrónico:velopez@unam.mx (V.E López-Alonso).
La revisión por pares es responsabilidad de la Universidad Nacional Autónoma de México.
http://dx.doi.org/10.1016/j.rmta.2016.11.001
2007-1523/© 2016 Universidad Nacional Autónoma de México, Facultad de Estudios Superiores Iztacala Este es un artículo Open Access bajo la licencia CC BY-NC-ND ( http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ ).
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PALABRAS CLAVE
Conducta
alimentaria;
Núcleo
paraventricular
hipotalámico;
CRH;
Adrenalectomía;
Secuenciade
saciedadconductual
Efecto hipofágico de la urocortina en ratas adrenalectomizadas: un análisis de la secuencia de saciedad conductual
Resumen Elobjetivodelapresenteinvestigaciónfueevaluarelefectodelaestimulaciónde losreceptoresCRH2delnúcleoparaventricularhipotalámicosobrelaingestadealimentoyla expresióndelasecuenciadesaciedadconductual(SSC)enratasadrenalectomizadas.Se tra-bajóconochogruposindependientesderatasWistar,cuatrogruposadrenalectomizados(ADX)
ycuatroconfalsacirugía.Atodoslossujetosselesimplantóunacánulaenelnúcleo paraven-tricularhipotalámico,yselesadministróunodecuatrotratamientos:vehículo,urocortina2 (UCN2,agonistadeCRH2),antisauvagina30(antagonistadeCRH2),yantisauvagina-30+UCN2 (pretratamiento).La administracióndeUCN2redujo laingestadehidratos decarbonoyde grasasenlasratasADX,debidoalainterrupcióndelaSSC;mientrasqueenlasratasconfalsa cirugía,laUCN2solodisminuyólaingestadegrasas,debidoaladelantodelaSSC.El pretra-tamientoprevinolosefectosinducidosenlasratasADX,peronoenlasratasconfalsacirugía EstosresultadosindicanquelosreceptoresCRH2modularonlaingestaylaSSCenlasratasADX,
loqueconstituyeunaporteimportanteenlacomprensióndelaetiologíadelaanorexiaydel patrónconductualasociadoaesta
©2016Universidad NacionalAutónomadeMéxico,FacultaddeEstudiosSuperiores Iztacala EsteesunartículoOpenAccessbajola licenciaCCBY-NC-ND(http://creativecommons.org/ licenses/by-nc-nd/4.0/)
Introducción
Lahormonaliberadoradecorticotropina(CRH,porsussiglas
eninglés) es un neuropéptido implicado enla regulación
delaconductaalimentariayenlahomeostasisenergética
Se han descritodos receptores CRH, el CRH1 y el CRH2,
ambosacopladosaproteínasGsyalaadenilatociclasapara
elincremento dela producción deladenosín monofosfato
cíclico.AlosreceptoresCRH1selesrelacionaconla
modu-lacióndealgunasconductascognitivas,entanto quealos
CRH2selesasociaconelcontroldelasconductas
motiva-cionalesylasdesupervivencia,comoson:laalimentación,
lareproducciónyladefensa.Lafamiliadeneuropéptidosde
laCRHestáconformadaporlaCRHylasurocortinas(UCN1,
UCN2yUCN3).LaUCN1seuneconaltaafinidadalos
recep-toresCRH1,entanto quela UCN2 ylaUCN3 seunen con
mayorafinidadalosreceptoresCRH2(FoxyLowry,2013)
Sehademostradoquelaadministracióncentralyperiférica
delaCRH,o algunodelospéptidosmiembrosdela
fami-liaUCN,disminuyen laingestadealimento (Currieetal.,
2001;Krahn,Gosnell,LevineyMorley,1988).Sinembargo,
el efectohipofágico puede presentaralgunas variaciones;
porejemplo,sehareportadoquelaadministración
perifé-ricadeUCN1indujounefectoinhibitoriomáspotentesobre
laingestadealimentoqueladeCRH,UCN2oUCN3(Tanaka
etal.,2009).Encambio,Wangetal.(2011)se˜nalanquela
administraciónintraperitonealdeUCN1oUCN2produjouna
hipofagiamáspotentequelaUCN3.Estoshallazgos
consoli-danlosresultadosdeinvestigacionesprevias,enlasqueya
sehabíareportadoquelaadministración
intracerebroven-triculardeUCN2producíaunefectoanorexigénico10veces
máspotente que la UCN3, el cual además fueprevenido
conelantagonistaselectivoCRH2antisauvagina30(ASV30)
(Pelleymounter,Joppa,LingyFoster,2004)
Investigaciones en las que se utilizó el análisis
micro-estructuraldelaconductaalimentariademostraronquela
administraciónintraperitonealdeUCN2redujola frecuen-ciadelosepisodiosalimentarios,ynoseobservaronefectos colateralesadversos(Feketeetal.,2011);entantoquela administracióndeUCN1 enelnúcleosupraóptico deratas con alimentación libre demoró el inicio de la ingesta de alimento, encomparacióncon animales privados(Fatima, Andrabi, Wolf,EngelmannySpina,2013).Noobstante, ya previamente,OhatayShibasaki(2004)habíanreportadoque
sibienunahoradespuésdeadministrarUCN2oUCN3 (intra-cerebroventricular) se reducía la ingesta de alimento, la UCN3tambiénsuprimíalaactividadmotora.Las controver-sias en losresultados de estas investigaciones evidencian
la necesidad de continuar el estudio de la relaciónentre losreceptoresCRH2ylaconductaalimentariaatravésde otrosmodelosexperimentalesyotrasherramientasde aná-lisis conductual, como son la adrenalectomía (ADX) y la secuenciadesaciedadconductual(SSC),respectivamente
SesabequelafuenteprincipaldeCRHselocalizaenel núcleoparaventricularhipotalámico(NPV),yqueregulala actividaddelejehipotálamo-pituitaria-adrenales(Bazhany Zelena,2013;Sawchenko,1987),cuyofuncionamiento anó-malo se ha vinculado con la patogénesis de la anorexia (Lawsonetal.,2013;Monteleoneetal.,2016).La interrup-cióndeestavía,pormediodeADX,constituye unmodelo experimental animal útil para la investigación dela con-ducta alimentaria, ya que la remoción de las glándulas adrenalesinducealteraciónenlaingestadealimentoyenel pesocorporal.Laingestadealimentosereduceenrespuesta
alaumentodelaexpresióndelácidoribonucleicomensajero
delaCRHenelNPV,ysesabequedichoefectosedebea
laausenciadelfeedbacknegativodelosglucocorticoidesen estenúcleo;entantoqueelreemplazoconcorticosterona restablecelaingesta(Freedman,CastonguayyStern,1985; Torres,Costa,Castro,Antunes-RodriguesyElias,2010) Res-pectoalpesocorporal,sehareportadoquelaADXloreduce, aunenratasobesas(Freedmanetal.,1985),posiblemente
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Sabino,Ruginsk,Antunes-RodriguesyElias,2009)
Además delanálisis microestructural,otraherramienta
que ha permitidorealizar unanálisisdetallado dela
con-ductaalimentariaeslaSSC.Halford,WanninayakeyBlundell
(1998) la definen como la transición ordenada de comer,
actividad, acicalamiento y descanso postingesta de
ali-mento La SSC puede ser utilizada para identificar si la
hipofagiaproducidaporunfármacosedebeamecanismos
«naturales»,ligadosalasatisfacción(terminacióndel
inter-valodealimentación),oamecanismoscolateralesadversos
quealteranelpatróndelaSSC(e.g.,náuseas,dolor,
seda-ción,hiperactividad).LaSSCestárelacionadaconelproceso
desatisfacciónyeldesarrollodelasaciedad(inhibiciónde
unapróximaalimentación).Enestecontexto,latransición
gráficaentrelaconducta decomeryla conductade
des-cansoseconsiderauníndiceconductualdesatisfacción;de
modoque el desplazamiento deeste puntoala izquierda
indicaeladelantodelprocesodesatisfacción,yel
despla-zamiento a la derecha se˜nala la demora o el retardo del
proceso(Rodgers,HolchyTallet,2010)
Las evidenciasmuestran laimportanteparticipaciónde
losreceptoresCRH2sobreelconsumodealimento,demodo
que el desbalance en este sistema de neurotransmisores
puedellevaralaobesidadoalaanorexia.Noobstante,no
estátotalmenteestablecidoelpapelfuncionaldecadauna
delasvariantesdeestosreceptores,nilospatrones
conduc-tuales quecaracterizanlaconductaalimentaria modulada
por estos Por lo tanto, el objetivode la presente
inves-tigación fue evaluar el efecto de la estimulación de los
receptores CRH2del NPV sobre la ingesta del alimento y
laexpresióndelaSSCenratasADX
Método
Sujetos
Seutilizaron51ratasmachodelacepaWistarde300gde
peso Los animales fueron provistos por el bioterio de la
FESIztacala-UNAM; además, losprocedimientos utilizados
enesteestudiosellevaronacabobajoloslineamientosde
laNormaOficialMexicana(NOM-O62-ZOO-1999)de
especi-ficacionestécnicasparalaproducción,cuidadoyusodelos
animalesdelaboratorio
Dieta
Los sujetos experimentales estuvieron bajo unparadigma
deautoseleccióndietariacon comederosseparados,para:
hidratosdecarbono(harinademaíz[maíznixtamalizado],
marcaMaseca,elaboradaporMolinos Azteca de Chalco S.A.
de C.V., planta Teotihuacán, Estado de México, México),
proteínas(proteínaaisladadesoyaal90%,marcaSoya
Pro-fam 646,elaboradaporAMD Protein Specialities Division,
Decatur, IL, EUA) y grasa (manteca vegetal, marca Inca,
elaboradaporAnderson Clayton & Co S.A de C.V.,planta
Tultitlán,EstadodeMéxico,México).Elordende
presenta-cióndeloscomederossecambiódiariamenteparaevitarel
desarrollode«preferenciadelugar»
Los fármacos que se utilizaron fueron: Antisauvagina 30 trifluoracetato (2g/0.5l, antagonista CRH2), adquirido con Sigma Chemical Co. (St Louis, MO, EUA), y Urocor-tina2(1g/0.5l,agonistaCRH2),adquiridoconPhoenix Pharmaceuticals Inc. (CA, EUA) La administración de los fármacos se realizó con una jeringa digital para fluidos
dealta precisión, adquirido con Hamilton Co. (Reno, NV, EUA).Ambosfármacosfueroninfundidosaunavelocidadde 0.25l/minenelNPVy,paraasegurarunadifusióncompleta
delas sustancias,el microinyectorpermaneció unminuto adicionaldentrodelacánulaguía
Cirugías
Estereotáxica. Los animales fueron anestesiados con pen-tobarbitalsódico(35mg/kg,intraperitoneal) pararealizar
laimplantacióndeunacánula guíaenelNPV.Las coorde-nadasestereotáxicas (posterior abregma-1.4mm,lateral -0.4mmyventral-6.4mm)seestablecierontomandocomo referenciaelatlasestereotáxicodePaxinosyWatson(1988)
ADX bilateral. Bajo la misma dosis de anestesia antes se˜nalada, se realizó una segunda cirugía paraextraer las glándulasadrenales(ratasADX),opararealizaruna«falsa cirugía»,enlaquesolosevisualizaronlasglándulas(ratas FC).LasratasADXtuvierondisponiblesoluciónsalinaal0.9% parabeber.Altérminodelascirugías,atodoslossujetosse lesaplicópenicilinabenzatínica(50,000U/kg)paraprevenir factiblesinfecciones, yposteriormenteseles permitióun periododerecuperacióndesietedías
Procedimiento
Alllegaral laboratorio,lossujetosexperimentales fueron asignadosaunodeochogrupos independientesy habitua-dos a las condiciones experimentales (e.g., ciclo de luz, dieta) por una semana Se colocaron aleatoriamente en cajashabitación-individualesconaccesoad libitumalaguay
alalimento(hidratosdecarbono,proteínasygrasa),bajoun cicloinvertidodeluz/oscuridadde12×12h(12:00p.m ini-ciodeoscuridad);condicionesquepermanecierondurante todala investigación Posterioral periodo de habituación
serealizólacirugíaestereotáxicaylaADX,olaFC.Luego delperiodo de recuperación,un grupo deratas con FC y
ungrupo de ratas ADX fueron asignados a uno de cuatro tratamientosfarmacológicos.Losfármacosy/oelvehículo fueronadministradosenelNPV.Todoslosgruposrecibieron dosinyecciones,conunlapsointermediode10min.Los tra-tamientosyelnombrecon elque fueronidentificados los grupos(entreparéntesis)sepresentanacontinuación:
1 Vehículo+vehículo(grupocontrologrupoADX,segúnla condicióndeFCodeADX,respectivamente);
2 Vehículo+Urocortina2(dosgrupos,unoporcada condi-cióndecirugía);
3 Antisauvagina 30+vehículo (dos grupos, uno por cada condicióndecirugía);y
4 Antisauvagina30+Urocortina2(dosgrupospretratados, unoporcadacondicióndecirugía)
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Figura 1 Cortehistológicoquemuestralaposicióndelacánula.F:fórnix;NPV:núcleoparaventricularhipotalámico;QO:quiasma
Una vez iniciado el periodode oscuridadse realizó un
registro de duración continua de 60min y, al finalizar el
registro,sepesaronloscomederos(cuidandoderecolectar
elalimentoderramado)paradeterminarelconsumode
ali-mento.Todaslassesionesfuerongrabadasconunacámara
decircuitocerradoparabajaintensidaddeluz
PararealizarelanálisisdelaSSC,los60minderegistro
con-tinuofueron divididos en12segmentos decincomin cada
uno,yseexaminaronlascategoríasconductualessiguientes:
alimentación (consumo de cualquier alimento), descanso
(lasrataspermanecen inactivasconlacabezaenelpiso),
actividad(desplazarse,husmearolevantarsesobrelaspatas
traserasdentrodelacaja-habitación)yacicalarse (rascar,
lameromordercualquierpartedelcuerpo)
Histología
Alfinalizarlassesiones,losanimalesfueronsacrificadoscon
pentobarbitalsódicoyperfundidosintracardialmente,
pri-merocon soluciónsalina yluegocon formalinaal10% El
cerebro se removió yse mantuvo siete días enformol al
10%.Posteriormente,paraverificarelsitiodeimplantación
delacánulaguía,serealizaroncorteshistológicoscoronales
de70mdeespesor
Análisis estadísticos
Para analizar losdatos relativos a la ingesta de alimento
(hidratosdecarbono,proteínasygrasa)seutilizóunANOVA
dedosvías(tratamiento×dieta).Conlosdatosdelos
pará-metrosdelaSSCseobtuvoel áreabajolacurva(ABC), y
posteriormenteserealizóunANOVAdeunavía.Enambos
casos,laobtencióndeunANOVAsignificativofueseguidode
4
3
2
1
0
Proteínas Carbohidratos
Control
Ingesta de grupos con falsa cirugía
UCN2 ASV30 Pretratado
Grasa
Figura 2 Media±errorestándardelamediadelconsumode
lapruebapost hocdeBonferroni.Losanálisisestadísticosy
elABCserealizaronconelprogramaGraphPadPrism5.01 Estosanálisissehicieronprimeroconlosgrupos correspon-dientesalasratasFC,ydespuésconlosgruposdelasratas ADX.Enamboscasos,solofueronconsideradoslosdatosde losanimalescuyacánulaselocalizóeneláreasuprayacente delNPV
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Control
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0
50 100 150 200 250 300 A
Per iodo
UCN 2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0
50 100 150 200 250 300 B
Periodo
ASV 30
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0
50 100 150 200 250 300 C
Periodo
Pretratado
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0
50 100 150 200 250 300 D
Alimentación Descanso
Acicalarse Actividad
Periodo
Figura 3 Media±errorestándardelamediadelosparámetrosdelasecuenciadesaciedadconductualenlosgruposconfalsa
Resultados
Histología
Después de verificar la localización de la cánula (fig 1),
losgrupos quedaronconstituidosporelnúmerodesujetos
siguiente: grupo control (n=6), grupo UCN2 (n=6), grupo
ASV30 (n=6), grupo pretratado (n=6), grupo ADX (n=9),
grupo ADX-UCN2 (n=6), grupo ADX-ASV30 (n=6), y grupo
ADX-pretratado(n=6)
Grupos con falsa cirugía
ElANOVAdedosvíasrevelódiferenciassignificativasenla
interaccióndieta×tratamiento[F(6,60)=4.57,p=0.0007]
Tambiénseencontrarondiferenciassignificativasenel
fac-tordieta [F (2,60)=32.72; p=0.0001] y,de acuerdo a la
pruebapost hoc,seidentificóunareducción dela ingesta
degrasaenlosgruposUCN2,ASV30vs.grupocontrol(fig.2)
Estoindicaquelostratamientosafectarondiferencialmente
laingestióndelosmacronutrientes,yparticularmentelade
grasa,entantoqueelpretratamientoconelantagonistafue incapazderevertiresteefecto
Enlafigura3seexpresaelanálisisdelaSSCregistrado paracadagrupoconFC.Elgrupocontrolexpresóelpatrón típico,demodoqueinicialmenteseobservólaconductade alimentación,seguida delas conductasde actividad yde acicalarse,yfinalmentelaconductadedescanso;entanto quelatransiciónentrelaconductadealimentaciónylade descansose presentó entrelos periodos siete yocho De igualforma, el grupo UCN2 desarrolló una SSC típica, sin embargoelpuntodetransición sedesplazó alaizquierda conrelaciónalgrupocontrol(adelantodelasecuencia),lo cualindicaundesarrollotempranodelprocesode satisfac-ción.SibienelgrupoASV30tambiéndesarrollólaSSCtípica,
latransiciónentrelaconductadealimentaciónylade des-cansoseestablecióenelperiodo ocho,lo queindica que
nohuboafectacióndelprocesodesatisfacción.Enelgrupo pretratadonoselocalizólatransiciónentreesasconductas
Enlafigura4seexponeelanálisisdelABCencuantoa losparámetros:alimentación,actividad, acicalarse y des-canso.El análisisANOVAdeunavía determinó diferencias significativasenalimentación[F(3,23)=12.49,p=0.0001],
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3,000
Actividad Acicalarse
Área bajo la curva
2,000
1,000
0
3,000
2,000
1,000
0
Control UCN2 ASV30 Pretratado
Control UCN2 ASV30 Pretratado
3,000
2,000
1,000
0
Control UCN2 ASV30 Pretratado
3,000
2,000
1,000
0
Control UCN2 ASV30 Pretratado
Figura 4 Media±errorestándardelamediadeláreabajolacurva(ABC)delosparámetrosdelasecuenciadesaciedadconductual
mientrasquelapruebapost hocse˜nalóunincrementoenel
tiempodestinadoalaalimentaciónenelgrupopretratado
vs.grupocontrol,UCN2yASV30.Eldescansotambién
regis-tró diferencias significativas [F (3, 23)=9.66, p=0.0004],
conaumentodelaconductaenelgrupoUCN2vs.grupo
con-trolygrupopretratado.Asimismo,laconductadeacicalarse
tambiénarrojódiferenciassignificativas[F (3,23)=10.49,
p=0.0002],conreducciónenlosgruposUCN,ASV30y
pre-tratado vs. grupo control Finalmente, cabe destacar el
hechode que el parámetro deactividad no registró
dife-renciasestadísticassignificativas
Grupos adrenalectomizados
ElANOVAdedosvíasreportódiferenciassignificativasenla
interaccióndieta×tratamiento[F(6,69)=3.46,p=0.0047]
Conrespectoalosefectosprincipales,elfactordieta
mos-tródiferenciassignificativas[F(2,69)=21.12,p=0.0001]
Lapruebapost hocdeBonferroniindicóunaumentodel
con-sumodehidratos decarbonoenel grupoASV30 vs.grupo
controlADX,yunadisminuciónenlosgruposUCN2y
pretra-tadovs.grupoASV30.Tambiénseencontróunaumentode
laingestadegrasaenelgrupopretratadovs.grupoUCN2
(fig.5).Asimismo,elanálisisdelfactor tratamientoindicó diferenciassignificativas[F(3,69)=7.42;p=0.0002] Esto indicaquelostratamientosenlasratasADXafectaron dife-rencialmentela ingestión deloshidratosdecarbono yde
la grasa El pretratamiento con el antagonista bloqueó el efectoanorexigénicoinducidoporlaUCN2sobrelaingestión
deloshidratosdecarbonoydelagrasa
Enlafigura6seexpresaelanálisisdelaSSCregistrado para cada grupo En el grupo control ADX se observó el patrón típico de la secuencia, ya que en los primeros periodossepresentólaconductadealimentación,seguida
de actividad y de descanso; y aunque la duración de la conducta de acicalarse fuerelativamente alta, noafectó
lapresenciadelaalimentación,entantoquelatransición entrelaalimentaciónyeldescansoseobservóenelperiodo cuatro Por el contrario, la administración de la UCN2 interrumpióeldesarrollonaturaldelaSSC,yaquela tran-sición entrelaconducta dedescansoyladealimentación
sepresentóentrelosperiodosunoydos;conductualmente, este efectohipofágico dela UCN2 seexpresaapartir del desarrollotempranodelaconductadedescanso.Entanto que la administración del antagonista ASV30 permitió el desarrollo del patrón típico de la SSC, considerando que
en los primeros periodos estos sujetos experimentales
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4
3
2
1
0
Proteínas
ADX
UCN2 ASV30 Pretratado
Carbohidratos Grasa
Figura 5 Media±errorestándardelamediadelconsumode
ción,acicalamiento,actividadydescanso;mientrasquela transiciónentrelaalimentación yel descansosepresentó
enelperiodocinco.Porúltimo,elgrupoconpretratamiento desarrollóelpatróntípicodelaSSC,conlatransiciónentre
laconductadealimentaciónyladedescansoenelperiodo cuatro;portanto,elpretratamientoprevinolainterrupción
delaSSCinducidaporlaUCN2
SibienelanálisisdelABCdelosparámetrosdelaSSCen lasratasADXnomostródiferenciasestadísticassignificativas (fig 7),laadministracióndelaUCN2tendióadisminuirel tiempode ingesta eincrementar el dedescanso y,por el contrario,elpretratamientotendióarevertirestosefectos
Discusión
EnlasratasconFCseencontrólareducciónselectivadela ingestadegrasaaladministrarUCN2(agonistaCRH2)enel NPV,efectoqueel pretratamientoconASV30(antagonista CRH2)fueincapazdebloquear.Esteresultadomuestraque
laingestióndegrasaaliniciodelciclodeoscuridadnose debióalaparticipacióndelosreceptoresCRH2,y posible-menteseanlosreceptoresCRH1losresponsablesdemodular
laingestadelagrasa.Encontraste,enlasratasADX,conla administracióndeUCN2seobservólareduccióndelaingesta
dehidratosdecarbonoydegrasa,efectoquefuebloqueado
ADX
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0
50 100 150 200 250 300
A
Periodo
UCN2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0
50 100 150 200 250 300
B
Periodo
ASV30
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0
50 100 150 200 250 300
C
Period o
Pretratado
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0
50 100 150 200 250 300
D
Periodo
Alimentación Descanso
Acicalarse Actividad
Figura 6 Media±errorestándardelamediadelosparámetrosdelasecuenciadesaciedadconductualenlosgrupos
descanso
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Alimentac ión
ADX UCN 2 ASV 30 Pretratad o 0
1,000 2,000 3,000
A
Desca nso
ADX UCN2 ASV 30 Pretratado 0
1,000 2,000 3,000
B
Acicalarse
ADX UCN 2 ASV30 Pret ratado 0
1,000 2,000
3,000 C
Actividad
ADX UCN 2 ASV 30 Pretratado 0
1,000 2,000
3,000 D
Área bajo la curva
Figura 7 Media±errorestándardelamediadeláreabajolacurva(ABC)delosparámetrosdelasecuenciadesaciedadconductual
conlaadministracióndelantagonistaASV30.Estos
resulta-dosaludenaque laingestióndehidratosdecarbonoyde
grasafue modulada por losreceptores CRH2 en las ratas
ADX.Alrespecto,investigacionespreviasse˜nalanqueestos
receptoresparticularmentemodulanlaingestióndehidratos
decarbonoaliniciodelciclonaturaldeoscuridad;mientras
quelos CRH1predominantementecontrolan la ingestade
grasaenelciclodiurno,yalfinaldelperiodode
alimenta-ciónenelciclooscuro(TempelyLeibowitz,1994).También
sehaobservadoqueeltiempodeaccióndelaUCN2sobre
laingestadealimento varíadependiendodeladosis yde
lascondicionesexperimentales,comosonelaccesolibreal
alimentovs.laprivación(OhatayShibasaki,2004).Enla
pre-senteinvestigación,conaccesolibrealalimento,lasratas
ADXfueronmássensiblesalefectoanorexigénicoinducido
porlaUCN2.Probablementeesteefectosedebeaque,en
lasratascon FC,laexpresióndelácidoribonucleico
men-sajerodelreceptorCRH2aumentahastalatercerahoradel
ciclodeoscuridad(OhatayShibasaki,2004),motivoporel
cuallosreceptoresnoseencuentranactivosydisponiblesa
launióndelligandoenlasprimerashorasdelciclode
oscu-ridad,retardandoasíelefectoanorexigénico.Encontraste,
enlasratasADX,lasobreexpresióndelaCRHestimulala
pre-senciayladisponibilidaddelosreceptoresCRH,facilitando
launión delligandoa losreceptores(HermanyMorrison,
1996)
El análisisconductual mostróalgunasdiferencias enel
desarrollo de la SSC entre las ratas con FC vs. las ratas
ADX Aunque ambos grupos control (FC y ADX)
presenta-ronel patróntípicodelaSSC,el grupoADXconcluyó más
tempranamentela ingesta de alimento que el grupo con
FC.InvestigacionespreviasreportanquelaADXdisminuye
un46%la ingesta dealimento enel periododeoscuridad
(Kumar, PapamichaelyLeibowitz,1988); mientrasquelos resultadosdelapresenteinvestigaciónindicanqueelefecto hipofágicoinducidoporlaADXsedebióaladelantodel pro-cesodesatisfacción, entendidaestacomo el procesoque permitedarporterminadalaingestadealimento,yquese derivadecondicionesfisiológicas,metabólicasysensoriales naturales(Blundelletal.,2010)
La administración de UCN2 en el NPV de las ratas con FC produjo una SSC típica, pero el punto de tran-sición entre la conducta de alimentación y la conducta
de descanso se desplazó a la izquierda con relación al grupo control, lo que indica que el proceso de satisfac-ciónseadelantó(Rodgersetal.,2010).Conductualmente,
el efecto anorexigénico inducido por la UCN2 en las ratas con FC se explica por la terminación temprana del procesodesatisfaccióny,consistentementeconeste resul-tado, el análisis del ABC también se˜naló un aumento significativo de la conducta de descanso El pretrata-miento con el antagonista CRH2 bloqueó el aumento de
la conducta de descanso, evidenciando que la modu-lación de esta conducta fue por los receptores CRH2
Al respecto, investigaciones previas se˜nalan que la CRH regula y/o modula el sue˜no y la vigilia (Opp, 1998) Pero, en contraste, la administración de UCN2 en las ratas ADX interrumpió el patrón típico de la SSC, el análisis cualitativo mostró que la conducta de descanso predominó en los primeros minutos del registro, despla-zando la presencia de la conducta de alimentación, la cual finalizó tempranamente(primer periodo de observa-ción) Esto sugiere que el efecto hipofágico inducido por
la UCN2 en las ratas ADX se debió al desarrollo prema-turo de la conducta de descansar, y no al proceso de satisfacción.Halfordetal (1998)interpretaneste patrón
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como interrupción dela SSC porsedación (periodoinicial
dominado por conductas de descanso que desplazan a la
conductadealimentación)
EnelgrupoADXpretratadosepreservóelpatrón
natu-ral de la SSC, revirtiendo la interrupción inducida por la
UCN2, unavezque latransición entrelaconducta de
ali-mentaciónyladedescansóretornóalperiodoestablecido
enelgrupocontrolADX;estosugierequeel desarrollode
laSSCfuemoduladoselectivamenteporreceptoresCRH2
Contrariamente,enelgrupopretratadoconFCnose
encon-tróelpatróntípicodelaSSC,loqueconfirmaquelaingesta
dealimentonofuemoduladapormecanismosselectivos,lo
queimpidióelbloqueodelosefectosinducidosporlaUCN2
sobrelaingestadealimento.Enestacondiciónlossujetos
estuvieronmás tiempo encontactocon el alimento,pero
noloconsumieron,ylatransiciónentrelaconductade
ali-mentación yel descanso noseestableció enunahora de
registro.Patronessemejantessehanobservadoen
paradig-masdeaversiónalsaboroantealimentonopalatable,en
dondeelanimalestámotivadoparacomer,peronoconsume
losuficienteparadesarrollarelpatrónclásicodelaSSC,de
modoque latransiciónentrelaconductadealimentación
yladedescansonoseidentifica(Ishii,Blundell,Halfordy
Rodgers,2003).Estoconfirmaqueelcontroldelaconducta
alimentaria enlas ratascon FC nofuemoduladasolo por
losreceptoresCRH2,sinoqueprobablementetambiénestén
participandoreceptoresCRH1,oalgúnotrosistemade
neu-rotransmisoresqueaumentesuactividadaliniciodelciclo
deoscuridad
Así,losresultadosdeestetrabajoindicanquelos
recep-tores CRH2 del NPV no solo controlan el consumo de
alimento,sinoquetambiénmodulaneltérminodela
con-ductaalimentaria Encondiciones fisiológicas«normales»,
laestimulacióndelosreceptoresCRH2aliniciodelperiodo
de oscuridadprodujo la secuenciade saciedad típica, sin
embargo no es posible descartar la participación de los
receptores CRH1 y de otros sistemas de
neurotransmiso-res Si bien condiciones de sobreexpresión del receptor
CRH2 (inducido por la ADX) producen el patróntípico de
la SSC, es con terminación prematura de la ingesta de
alimento
Portanto,seconcluyequelaestimulacióndelos
recep-toresCRH2delNPValiniciodelciclodeoscuridadredujola
ingestadehidratosdecarbonoydegrasasenlasratasADX
Noobstante,enlasratasconFCsolodisminuyóladegrasas,
posiblementedebidoalaactivacióndereceptoresCRH1.El
análisisdelaSSCrevelóqueelefectoanorexigénico
indu-cidoporlaUCN2enlasratasADXsedebióalainterrupción
delprocesodesatisfacciónporsedación,elpretratamiento
con el antagonistaASV30 previnola interrupción inducida
por la UCN2, lo cual indica que la SSC fue modulada por
receptoresCRH2.EnelcasodelasratasconFC,laUCN2
pro-dujounaSSCtípica,adelantandoelprocesodesatisfacción
Elpretratamientoconelantagonistafueincapazderevertir
esteefecto,locualaludeaquelaSSCfuemoduladasoloen
parteporreceptoresCRH2aliniciodelciclodeoscuridad,y
posiblementeenestemomentotambiénesténparticipando
los receptores CRH1, u otro sistema de
neurotransmiso-res Estos resultados constituyen un aporte importante
para un mejor entendimiento de la etiología
neurobioló-gica de la anorexia y del patrón conductual asociado a
esta
Financiación
Estetrabajoesproductodelosfondosotorgadospor UNAM-DGAPA-PAPIITalosproyectosIN306711eIN224214
Conflicto de intereses
Losautoresmanifiestannotenerconflictodeintereses
Agradecimientos
Esta investigación forma parte de la tesis doctoral de la primeraautora,quienagradecealPosgradoenCiencias Bio-lógicasdelaUNAMlaformaciónacadémicarecibidaatravés
desuProgramadeDoctorado,asícomoalConsejoNacional
deCienciayTecnologíaporlaconcesióndelabecaotorgada paralarealizacióndesusestudios
Referencias
Bazhan, N y Zelena, D (2013) Food-intake regulation during stress by the hypothalamo-pituitary-adrenal axis.Brain Research Bulletin, 95,46 -53.
Blundell, J., Graaf, C., Hulshof, T., Jebb, S., Livingstone, B., Lluch, A., et al (2010) Appetite control: Methodological aspects of the evaluation of foods.Obesity Review, 11(3),251 -270.
Currie, P J., Coscina, D V., Bishop, C., Coiro, C D., Koob, G F., Rivier, J., et al (2001) Hypothalamic paraventricular nucleus injections of urocortin alter food intake and respiratory quo-tient.Brain Research, 916(1 -2),222 -228.
Fatima, A., Andrabi, S., Wolf, G., Engelmann, M y Spina, M G (2013) Urocortin 1 administered into the hypothalamic supraop-tic nucleus inhibits food intake in freely fed and food-deprived rats.Amino Acids, 44(3),879 -885.
Fekete, E M., Zhao, Y., Szücs, A., Sabino, V., Cottone, P., Rivier, J., et al (2011) Systemic urocortin 2, but not urocortin 1
or stressin1-A, suppresses feeding via CRF2 receptors without malaise and stress. British Journal of Pharmacology, 164(8),
1959 -1975.
Fox, J H y Lowry, C A (2013) Corticotropin-releasing factor-related peptides, serotonergic systems, and emotional behavior.
Frontiers in Neuroscience, 7,1 -16.
Freedman, M R., Castonguay, T W y Stern, J S (1985) Effect
of adrenalectomy and corticosterone replacement on meal pat-terns of Zucker rats.American Journal of Physiology, 249(5),
584 -594.
Halford, J C G., Wanninayake, C D y Blundell, J E (1998) Beha-vioral satiety sequences (BSS) for the diagnosis of drug action
on food intake.Pharmacology, Biochemistry & Behavior, 61(2),
159 -168.
Herman, J P y Morrison, D G (1996) Immunoautoradiographic and in situ hybridization analysis of corticotropin-releasing hor-mone biosynthesis in the hypothalamic paraventricular nucleus.
Journal of Chemical Neuroanatomy, 11(1),49 -56.
Ishii, Y., Blundell, J E., Halford, J C G y Rodgers, R J (2003) Palatability, food intake and the behavioural satiety sequence in male rats.Physiology & Behavior, 80(1),37 -47.
Krahn, D D., Gosnell, B A., Levine, A S y Morley, J E (1988) Behavioral effects of corticotropin-releasing factor: Localiza-tion and characterization of central effects. Brain Research, 443(1 -2),63 -69.
Kumar, B., Papamichael, M y Leibowitz, S F (1988) Feeding and macronutrient selection patterns in rats: Adrenalectomy
Trang 10Cómo citar este artículo: Rito-Domingo, M., et al Hypophagic effect of urocortin in adrenalectomized
and chronic corticosterone replacement.Physiology & Behavior,
42(6),581 -589.
Lawson, E A., Holsen, L M., DeSanti, R., Santin, M., Meenaghan,
E., Herzog, D B., et al (2013) Increased
hypothalamic-pituitary-adrenal drive is associated with decreased appetite
and hypoactivation of food motivation neurocircuitry in anorexia
nervosa.European Journal of Endocrinology, 169(5),639 -647.
Monteleone, A M., Monteleone, P., Serino, I., Amodio, R., Monaco,
F y Maj, M (2016) Underweight subjects with anorexia nervosa
have an enhanced salivary cortisol response not seen in weight
restored subjects with anorexia nervosa.
Psychoneuroendocri-nology, 70,118 -121.
Ohata, H y Shibasaki, T (2004) Effects of urocortin 2 and 3
on motor activity and food intake in rats. Peptides, 25(10),
1703 -1709.
Opp, M R (1998) Rat strain differences suggest a role for
corti-cotropin releasing hormone in modulating sleep.Physiology &
Behavior, 63(1),67 -74.
Paxinos, G y Watson, Ch (1988).The rat brain in stereotaxic
coor-dinates.New York: Academic Press.
Pelleymounter, M A., Joppa, M., Ling, N y Foster, A C (2004).
Behavioral and neuroendocrine effects of the selective CRF2
receptor agonists urocortin II and urocortin III.Peptides, 25(4),
659 -666.
Rodgers, R J., Holch, P y Tallet, A J (2010) Behavioural satiety
sequence (BSS): Separating wheat from chaff in the behavioural
pharmacology of appetite.Pharmacology, Biochemistry & Beha-vior, 97(1),3 -14.
Sawchenko, P E (1987) Evidence for a local site of action for glu-cocorticoids in inhibiting CRF and vasopressin expression in the paraventricular nucleus.Brain Research, 403(2),213 -224 Tanaka, C., Asakawa, A., Ushikai, M., Sakoguchi, T., Amitani, H., Terashi, M., et al (2009) Comparison of the anorexigenic activity of CRF family peptides. Biochemical and Biophysical Research Communications, 390(3),887 -891.
Tempel, D L y Leibowitz, S F (1994) Adrenal steroid recep-tors: Interactions with brain neuropeptide systems in relation to nutrient intake and metabolism.Journal of Neuroendocrinology, 6(5),479 -501.
Torres, E., Costa, L E., Castro, M., Antunes-Rodrigues, J y Elias, L.
L (2010) Corticotrophin-releasing factor mediates hypophagia after adrenalectomy, increasing meal-related satiety responses.
Hormones and Behavior, 58(5),714 -719.
Torres, E., Sabino, H A., Ruginsk, S G., Antunes-Rodrigues,
J y Elias, L L (2009) Hypophagia induced by glucocor-ticoid deficiency is associated with an increased activation
of satiety-related responses. Journal of Applied Physiology, 106(2),596 -604.
Wang, L., Stengel, A., Goebel, M., Martinez, V., Gourcerol, G., Rivier, J., et al (2011) Peripheral activation of corticotropin-releasing factor receptor 2 inhibits food intake and alters meal structures in mice.Peptides, 32(1),51 -59.