BÀI 6 sắc kí TRAO đổi ION và sắc kí GIẤY đại học y dược TP HCM KHOA dược bộ môn hóa lý mục TIÊU

3 S ẮC KÍ TRAO ĐỔI ION Sắc kí trao đổi ionlà một quá trình cho phépphân tách các ion hay các phân tử phân cực dựa trên ái lực khác nhau của mỗi ion đối với pha tĩnh và pha động..  hiện

Trang 1

1

BÀI 6

SẮC KÍ TRAO ĐỔI ION VÀ SẮC KÍ GIẤY 1

ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP.HCM KHOA DƯỢC

BỘ MÔN HÓA LÝ

MỤC TIÊU

1 Tách riêng ion Ni ++ và ion Co ++ bằng phương pháp sắc kí trao đổi ion.

2 Tách riêng các acid amin trong hỗn hợp bằng phương pháp sắc kí giấy.

2

BM Hóa Lý-ÐHYDTPHCM BM Hóa Lý-ÐHYDTPHCM BM Hóa Lý-ÐHYDTPHCM

Trang 2

2

LÝ THUYẾT

Nhà thực vật học người NgaMikhail Tsvet phát minh ra kĩ thuật sắc kí vào năm 1903 khi ông đang nghiên cứu về

chlorophyl.

Năm 1952, Archer John Porter Martin và Richard Laurence Millington Synge được trao giải Nobel Hoá học cho phát minh của họ về sắc kí phân bố.

3

Sắc ký là quá trình tách dựa trên sự phân bố liên tục các cấu tử chất phân tích trên hai pha: PHA ĐỘNG (mobile phase) – PHA TĨNH (stationary phase).

P HÂN LOẠI CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ

4

Trang 3

3

S ẮC KÍ TRAO ĐỔI ION

Sắc kí trao đổi ionlà một quá trình cho phépphân tách các ion hay các phân tử phân cực dựa trên ái lực khác nhau

của mỗi ion đối với pha tĩnh và pha động.

 hiện tượng trao đổi thuận nghịch giữa các ion linh động/pha tĩnh với các ion/dung dịch phân tích khi cho dung dịch này đi qua cột nạp đầy pha tĩnh.

Pha tĩnhgọi là chất trao đổi ion (ionit): cationit và anionit.

5

Cationit Anionit

Cơ chế trao đổi ion đối với Cationit

6

Trang 4

4

Cơ chế trao đổi ion đối với Anionit

7

CÁC GIAI ĐOẠN CƠ BẢN TIẾN HÀNH SẮC KÍ CỘT TRAO ĐỔI ION

1 GĐ1: kiểm tra nhựa trao đổi ion cân bằng với ion đối của nó 

cột sạch.

2 GĐ2: cho hỗn hợp ion cần trao đổi tiếp xúc với nhựa trao đổi

ion  các đối ion được loại ra khỏi nhựa.

3 GĐ3: gia tăng nồng độ của dung dịch ly giải để ion ly giải đủ

mạnh để tranh giành trao đổi với nhựa  tạo hợp chất chứa ion cần tách.

4 GĐ4: tái tạo nhựa, trả lại tình trạng nhựa như ban đầu 8

Trang 5

5

9

CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG

1 Điện tích của ion

2 Kích thước của ion

3 Bán kính solvat hóa

4 Khả năng phân cực của ion

5 pH của dung môi rửa giải

Nước

Cột sắc ký

10

Nhựa trao đổi ion cationit

TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM

Trang 6

6

1 Kiểm tra cột sắc ký

11

5 ml nước cất + 1 giọt cam methyl ống màu chuẩn

Nước / cột sắc ký +

1 giọt cam methyl Nước trong cột SK còn acid

1 giọt cam methyl

2 Dùng pipette hút 1,2 ml NiCl2và 0,6 ml Co(NO3)2 cho vào 1 ống nghiệm, lắc đều rồi cho vào cột sắc ký

12 TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM

Trang 7

7

3. Cho nước cất qua cột (khoảng 300 ml) đến khi nào nước chảy ra không còn ion H +

13

1 giọt cam methyl

4. Cho dung dịch Citrat I qua cột với vận tốc 2 – 3 ml/

phút Dùng ống đong để hứng từng 10 ml.

Nếu không có màu thì đổ bỏ

Ni ++ 14

Nếucó màu thì cho vào các ống nghiệm.

Citrat 1

Trang 8

8

Khi dung dịch chảy ra hết màu hoặc còn màu nhạt thì cho tiếp Citrat II vào

Thực hiện tương tự như với Citrat I

để thu được các ống nghiệm có màu.

Citrat II

15

16

5. Hồi phục cột: cho 20 ml dung dịch HCl 5% chảy qua cột, rửa cột bằng nước cất cho đến khi nước chảy ra

không còn H +

20 ml dung dịch HCl 5%

Trang 9

9

17

RH + Ni 2+ RNi +2H +

RH + Co 2+ RCo + 2H +

Citrat (NH 4 ) 2 Citrat 2- + 2NH 4

RNi + 2NH 4 R(NH 4 ) 2 + Ni 2+

RCo + 2NH4+ R(NH4)2+ Co 2+

Co 2+ + Citrat 2- Co-Citrat Phục hồi cột:

R(NH 4 ) 2 + 2H + RH 2 + 2NH 4+

Ni 2+ + Citrat 2- Ni-Citrat

(1) (2)

(3)

(5) (4)

(6)

← Rửa giải

CƠ CHẾ QUÁ TRÌNH TÁCH

ION Ni ++ VÀ Co ++

 CƠ CHẾ: phân bố

Pha tĩnh: nước hấp phụ trên giấy

Pha động: dung môi Partridge

 Giấy: giá mang

18 SẮC KÍ GIẤY

Trang 10

10

19

Vạch xuất phát

Vạch tiền tuyến

10 cm 1cm Vết chấm acid amin

Chấm các acid amin lên giấy

SẮC KÍ GIẤY (TÁCH ACID AMIN)

20

Vạch xuất phát

Vạch tiền tuyến

10 cm 1cm

Dung môi Partridge

Giấy sắc ký Nắp bình

Vết chấm acid amin

Triển khai sắc ký: treo giấy sắc ký vào bình sắc ký

SẮC KÍ GIẤY (TÁCH ACID AMIN)

Trang 11

11

21

Sắc ký giấy :

Tách riêng các acid amin trong hỗn hợp

 Phát hiện các acid amin bằng cách phun ninhydrin

Rf = x/ 10

Đạt yêu cầu về kỹ

thuật

x 2 = x’ 2

x1 = x’1

x1 x2 x’1

x’2

BÁO CÁO KẾT QUẢ

Sắc ký trao đổi ion

 Báo cáo số lượng ống nghiệm ở mỗi dãy màu.

 Giải thích cơ chế tách ion Ni 2+ và Co 2+

 Giải thích cơ chế sắc ký trao đổi ion?

22

Trang 12

12

Sắc ký giấy

 Nộp kết quả sắc ký giấy.

 Tính Rf So sánh Rfcủa acid amin ở vết đơn chất với Rfcủa acid amin cùng loại ở vết hỗn hợp Biện luận kết quả.

 Trình bày cơ chế sắc ký giấy.

23

BÁO CÁO KẾT QUẢ

Định dạng
Số trang	12
Dung lượng	2,26 MB