Bài giảng Thực hành Vi sinh vật ứng dụng trong chăn nuôi

Bài giảng Thực hành Vi sinh vật ứng dụng trong chăn nuôi cung cấp cho người học những kiến thức như: Sử dụng nấm men trong chế biến thức ăn gia súc; xác định một số hoạt tính sinh học của vi sinh vật. Mời các bạn cùng tham khảo!

Thực hành VSV ứng dụng trong

chăn nuôi

Mục đích:

Nắm được phương pháp phân lập, nhân giống vi

khuẩn, nấm men sử dụng trong bảo quản, chế biến

thức ăn

Nắm được phương pháp ủ chua thức ăn và phương

pháp lên men thức ăn với các chủng vsv chọn lọc

Yêu cầu:

 Tham gia đầy đủ 2 bài thực tập, thiếu 1 bài  không được thi!!!!

 Hoàn thành bài tập của 2 bài thực tập

 Tuân thủ nội qui của phòng thực tập

Bài 1: Sử dụng nấm men trong chế biến

thức ăn gia súc

Nội dung:

1. Thí nghiệm lên men với nấm men

2. Sử dụng nấm men để lên men thức ăn tinh

bột làm thức ăn cho gia súc

I Thí nghiệm lên men với nấm men

Mục đích: quan sát quá trình lên men đường của nấm

Bình 1: Đường 5g + 200ml nước ấm + 20ml nấm men

Bình 2: Đường 10g + 200ml nước ấm + 20ml nấm men

Bình 3: Đường 20g + 200ml nước ấm + 20ml nấm men

Bình 4: Rỉ mật đường 10g + 200ml nước ấm + 20ml nấm men

Cách tiến hành : Cho vào bình tam giác 200ml nước ấm 30-40oC

Cho đường và nấm men vào, khuấy đều đến khi tan hết  Buộc

bóng bay vào miệng ống

Để vào tủ ấm 35oC Đánh giá kết quả sau 60 phút  quan sát sự

thay đổi.

Sau 30 phút Chuẩn bị thí nghiệm

Ống 1 (màu đỏ) : Không lên men Ống 2: lên men k sinh khí

Ống 3 lên men có sinh CO2

Đánh giá kết quả:

1 Đánh giá tốc độ lên men ở các bình lên men:

- Sử dụng thước đo chiều cao cột bọt khí CO2 ở bình

- Sử dụng dây đo đường kính bóng bay  đo lại bằng thước cm

- Mô tả biến đổi của các ống thí nghiệm: Màu sắc, độ đục, sinh hơi, mùi Mô tả trạng thái của bóng bay

 Đưa ra kết luận về tốc độ lên men

2 Giải thích cơ chế:

- Giải thích quá trình lên men

- Viết phương trình lên men tổng quát

- Sản phẩm của quá trình lên men này là gì? Yếu tố nào làm căng bóng bay

- Yếu tố nào là biến số trong thí nghiệm này

3 Quan sát kính HV: Lấy 1 giọt dung dịch trong ống nghiệm, đặt lên lam kính và quan sát trực tiếp

dưới kính hiển vi, sử dụng vật kính 40x (không sử dụng dầu soi)

Chỉnh kính hiển vi: Đặt tiêu bản lên khay kính,

xoay vật kính 10x vào trục Giảm đèn đến mức

2Nâng khay kính lên sát vật kính  Chỉnh cho đến khi thấy ảnh  Chuyển vật kính 40xsử dụng

ốc vi cấp điều chỉnh độ nét, giảm đèn cho vi trường tối để dễ quan sát

 Quan sát tế bào nấm men, tìm tế bào nảy chồi và

vẽ hình

II Sử dụng nấm men lên men thức ăn tinh bột sử dụng trong chăn nuôi (phương pháp ủ men gia súc)

1 Vật liệu:

+ Giống: Giống nấm men sử dụng:

Saccharomyces sp, Torula sp…

Sử dụng ống nuôi cấy nấm men giống hoặc

Men giống thương mại (Men Vi sinh hoạt tính)

+ Đường ( hoặc rỉ mật đường)

2 Cách tiến hành

a Cách 1: Sử dụng ống nuôi cấy men giống

 Bước 1: chuẩn bị “dung dịch men cái”:

- Đường 5% + Nước sạch (nước ấm 30-40oC) + ống men giống  khuấy tan, để ở nhiệt độ 25-30oC/24h

Tỉ lệ cấy men giống: 10g-20g men giống/lit môi trường

- Cách lấy men giống: Cho vào ống men giống nước cất hoặc nước lọc vô trùng  sử dụng đũa thủy tinh đánh nhẹ nhàng trên bề mặt thạch cho đến khi các tế bào nấm men tan hết  đổ vào bình nuôi cấy

 Bước 2: Trộn thức ăn bột với dung dịch men cái

Cho từ từ dung dịch men cái vào, trộn đều với bột; có thể bổ sung nước sạch để đảm bảo độ ẩm 55-60% cho vào bình/túi ủ  để

ở nhiệt độ 25-30oC/24h (mùa hè) và 48-72h (mùa đông)

b.Cách 2: Sử dụng chế phẩm Men thương mại (Men vi sinh hoạt tính)

Bước 1:

- Đường 5% + Nước sạch (nước ấm 30-40oC) + men giống

 trộn đều, để ở nhiệt độ 25-30oC/24h

- Cụ thể: Trộn đều bột với men giống, trộn lượng nhỏ sau

đó mới trộn lượng lớn  Bổ sung nước ấm, trộn đều,

đảm bảo độ ẩm 55-60%  cho vào thùng/bình/túi ủ 

để ở nhiệt độ 25-30oC/24h (mùa hè) và 48-72h (mùa

Nếu nắm bột tạo thành khuôn, không dính ướt  đủ ẩm

 Bước 2: Đánh giá chất lượng lên men

Như cách 1

Phương pháp ủ ẩm

Ủ men ướt

Sử dụng nấm men ủ vỏ gấc

Máy trộn thức an ủ men

Bài 2 Xác định một số hoạt tính sinh

Nguyên vật liệu

1 Chủng giống vsv :

- Giống vk Saccharomyces cerevisiae và Lactobacillus

2 Môi trường :

- Môi trường tinh bột tan

Pepton: 5g; Tinh bột tan: 10g Thạch:20g; Nước cất: 1000ml

- Môi trường MRS (de Man’s Rogosa and Sharpe):

 Cao nấm men 5g D-glucose 20g

 Tween 80 0.1g K2HPO4 2g

 Sodium acetate 5g Triammonium citrate 0.2g

 MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.4H2O 0.05g

 Nước cất 1000ml

 Điều chỉnh pH =6,2 - 6,6; hấp tiệt trùng ở 121oC/15 - 20 phút

3 Hóa chất : NaOH 0,1N, dd Phenolphatalein

Xác định khả năng phân giải tinh bột

 Chuẩn bị môi trường tinh bột tan

 Nuôi cấy nấm men Saccharomyces cerevisiae trên môi trường thạch đĩa có bổ sung tinh bột tan Cấy dạng điểm Nuôi cấy trong tủ ấm 37oC/24h

 Đánh giá kết quả:

 Sau 24h, lấy đĩa vk đã mọc ra Nhỏ dung dịch lugol khắp bề mặt đĩa

 Nếu vk có khả năng phân giải tinh bột  xung

quanh khuẩn lạc có vòng phân giải trong suốt  đo đường kính vòng phân giải

Phân giải tinh bột dương tính

Phân giải tinh bột âm tính

Xác định khả năng sinh axit lactic

 Cấy vk Lactobacillus vào môi trường sữa Nuôi cấy ở

32oC/24h

 Chuẩn độ: Dùng phương pháp chuẩn độ Therner để xác định khả năng sinh axit lactic của các chủng vi khuẩn Lactic

 Lấy 10ml dịch lên men, bổ sung 20ml nước cất và

thêm 1 – 2 giọt Phenolphtalein 1%

 Chuẩn độ bằng NaOH 0,1N đến khi xuất hiện màu

hồng nhạt bền trong 30 giây thì dừng lại

 Theo tiêu chuẩn A.O.A.C 1990: 1ml NaOH 0,1N

chuẩn độ được tương đương với 9,008mg axit lactic

Khả năng đông vón sữa

 Sử dụng sữa tươi tiệt trùng đã tách bơ, cho vào ống nghiệm mỗi ống 7-8ml Cấy vi khuẩn lactic vào Theo dõi ở 30-

 Đôn vón +: Casein bị đông vón chậm sau 20-24h nuôi cấy, sữa

có dạng bã đậu, có nhiều dung dịch trong

 Âm tính: Sữa ở dạng dung dịch đồng nhất như trước khi nuôi cấy

Have fun!