Bài giảng Giá trị của DNA thai tự do trong sàng lọc trước sinh không xâm lấn phát hiện lệch bội NST thai sử dụng công nghệ giải trình tự bán dẫn - Ths. Bs. Hoàng Hải Yến

Bài giảng Giá trị của DNA thai tự do trong sàng lọc trước sinh không xâm lấn phát hiện lệch bội nst thai sử dụng công nghệ giải trình tự bán dẫn do Ths. Bs. Hoàng Hải Yến biên soạn nhằm xác định giá trị của cffDNA trong sàng lọc trước sinh không xâm lấn phát hiện lệch bội NST 21, 18, 13 và NST giới tính thai sử dụng công nghệ giải trình tự bán dẫn dựa vào phương pháp SeqFF.

GIÁ TRỊ CỦA DNA THAI TỰ DO TRONG SÀNG LỌC TRƯỚC SINH KHÔNG XÂM LẤN PHÁT HIỆN LỆCH BỘI NST THAI SỬ DỤNG CÔNG NGHỆ GIẢI TRÌNH TỰ BÁN DẪN

HỘI NGHỊ SẢN PHỤ KHOA TOÀN QUỐC 2019

Báo cáo viên: Ths.Bs Hoàng Hải Yến

Diana Wellesley et al Rare chromosome abnormalities, prevalence and prenatal diagnosis rates from

population-based congenital anomaly registers in Europe European Journal of Human Genetics (2012) 20, 521–526

bội NST giới tính

hinhanhykhoa.com

SÀNG LỌC, CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH HIỆN NAY

MỤC TIÊU CỦA NIPT

NONINVASIVE PRENATAL SCREENIG (NIPS)

Ứng dụng

CỦA NIPS

Giảm tỷ lệ dương tính

giả

Tỷ lệ phát hiện cao Giảm rủi ro

CƠ SỞ NIPS: DNA THAI TỰ DO (cffDNA)

Nguồn gốc: Tế bào rau thai

tuần thai

Thời gian bán huỷ 16,3 phút, mất

sau sinh 2 giờ Đoạn DNA ngắn: 150-200 bp

Tăng dần theo tuổi thai: 3-13%

Thomas Harasim et al Current status of non-invasive prenatal testing (NIPT): genetic counseling, dominant methods and

overall performance J Lab Med 2016; 40(5): 299–306

MPS dùng vị trí đích

là các đoạn đích ngắn đặc hiệu của

PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN cffDNA

Giải trình tự từng đoạn song

song khối lượng lớn ngẫu nhiên

(MPS)

Phát hiện trisomy trong huyết tương phụ thuộc vào tỷ lệ cfDNA thai

Tỷ lệ cfDNA thai càng cao, càng dễ phát hiện lệch bội

TẦM QUAN TRỌNG CỦA cfDNA

Tỷ lệ cfDNA thai 3-4% giảm độ nhạy của NIPS (*)

(*) Sparks AB, Struble CA, Wang ET, Song K, Oliphant A: Non-invasive prenatal detection and selective analysis of free DNA obtained from maternal blood: evaluation for trisomy 21 and trisomy 18 Am J Obstet Gynecol

Đồng thuận với thai kỳ nguy cơ cao

MỤC TIÊU

Xác định giá trị của cffDNA trong sàng lọc trước sinh không xâm lấn phát hiện lệch bội NST 21, 18, 13 và NST giới tính thai sử dụng công nghệ giải trình tự bán

dẫn dựa vào phương pháp SeqFF

hinhanhykhoa.com

ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Thai đơn ≥10 tuần có từ 1 hay nhiều tiêu chuẩn sau:

Kết quả triple test, combined test nguy cơ cao >1/250

TM ≥ 35 tuổi.

Siêu âm có bất thường hình thái

TS đẻ con có lệch bội NST, thai chết lưu, sảy thai nhiều lần…

Thai phụ đồng ý tham gia nghiên cứu

Tiêu chuẩn lựa chọn

ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Thai < 10 tuần, đa thai hoặc song thai tiêu biến

Thai phụ được truyền máu trong vòng 30 ngày.

Thai phụ đã thực hiện phẫu thuật cấy ghép hoặc trị liệu sử dụng

tế bào gốc

Thai phụ mắc ung thư, thai phụ thực hiện IVF xin noãn

Thai phụ có chuyển đoạn NST cân bằng, lệch bội NST.

Thai phụ không đồng ý tham gia nghiên cứu

Tiêu chuẩn loại trừ

hinhanhykhoa.com

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả cắt ngang, theo dõi dọc

Cỡ mẫu nghiên cứu: 1231 mẫu

Địa điểm nghiên cứu:

Thời gian nghiên cứu: 5/2016 – 8/2018

Xử lý số liệu: phần mềm Epidata 3.1, STATA 14 và các thuật

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Mẫu bệnh phẩm: 10ml máu tĩnh mạch vào ống Streck

Dụng cụ nghiên cứu: TTSL,CĐTS, BVPSHN

Hóa chất nghiên cứu:

của Thermo Fisher.

hinhanhykhoa.com

Phân tích

Kq

KỸ THUẬT SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU

ISP

SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU

1231 thai phụ nguy cơ cao

Giải trình tự thế hệ mới NGS

Nguy cơ thấp Nguy cơ cao

Theo dõi đến khi sinh Karyotype

Kết luận

Chọc hút dịch ối (từ tuần 16)

Sàng lọc (z-score) Lấy máu tĩnh mạch

hinhanhykhoa.com

KẾT QUẢ

1 ĐẶC ĐIỂM ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

- Gil MM, Quezada MS, Revello R, Akolekar R, Nicolaides KH (2015) Analysis of cell-free DNA in maternal blood in screening for

fetal aneuploidies: updated meta-analysis Ultrasound Obstet Gynecol

- Saskia Tamminga, Merel van Maarle, et al (2016) Maternal Plasma DNA and RNA Sequencing for PrenatalTesting Advances in

Clinical Chemistry

63,8

1,36 3,8

3 TỶ LỆ cffDNA VÀ TUỔI THAI cff DNA

6 GIÁ TRỊ cffDNA PHÁT HIỆN LỆCH BỘI

mắc (%)

7 GIÁ TRỊ cffDNA PHÁT HIỆN LỆCH BỘI

100 (88–100)

100 (100-100)

(75–100)

99,8 (99–100)

87 (60–98)

100 (100-100)

(16–100)

99,8 (99–100)

40 (5–85)

100 (100-100)

(54–100)

99,8 (99–100)

67 (30–93)

100 (100-100)

(93–100)

99,3 (99–100)

86 (75–94)

100 (100-100)

Zang H, Gao Y, Jiang F, et al (2015).Non-invasive prenatal testing for trisomies 21, 18 and 13: clinical experience from 146,958 pregnancies Ultrasound Obstet Gynecol 2015 May;45(5):530-8

8 GIÁ TRỊ cffDNA PHÁT HIỆN LỆCH BỘI

Tỷ lệ thai nguy cơ cao với lệch bội

- Shan Dan, Wei Wang, et al (2012) Clinical application of massively parallel sequencing-based prenatal noninvasive fetal

trisomy test for trisomies 21 and 18 in 11105 pregnancies with mixed risk factors Prenatal Diagnosis,

- Akolekar R, Beta J, Picciarelli G, Ogilvie C, D’Antonio F (2015) Procedure-related risk of miscarriage following amniocentesis and chorionic villus sampling: a systematic review and meta-analysis Ultrasound Obstet Gynecol

Xét nghiệm sàng lọc không xâm lấn phân tích cffDNA

từ huyết tương mẹ, sử dụng công nghệ giải trình tự bán dẫn dựa vào phương pháp SeqFF có độ nhạy và độ đặc hiệu đều trên 99% phát hiện lệch bội NST 21, 18,

13 và NST giới tính thai nhi trên đối tượng thai phụ có

nguy cơ cao mang thai lệch bội NST

KẾT LUẬN

EM XIN TRÂN TRỌNG CẢM ƠN