Nghiên cứu trích ly polysaccharide từ nấm linh chi bằng kỹ thuật co2 siêu tới hạn và thử nghiệm hoạt tính sinh học

Ngoài ra, n医m linh chi còn ch泳c" 8c" f衣ng các h嬰p ch医t có tính sinh h丑e" pj逢"glycoprotein, polysaccharide, terpenoid, steroid, phenol, nucleotide và các d磯n xu医t c栄a chúng.. H嬰p ch医t pol

(Study on extracting polysaccharides from Ganoderma lucidum by supercritical carbon dioxide

and bioactivity evaluation)

VT姶云PI A萎K J窺E BÁCH KHOA

-

PIW[右P VJ卯 KIM NGÂN

PIJKçP"E永W"VTëEJ"N["RQN[UCEEJCTKFG

SIÊU V閏K J萎P VÀ VJ盈 PIJK烏O"JQ萎V TÍNH SINH J窺E

Ejw{‒p"pi pj<"M駅"VJW一V"JïC"J窺E

Mã u嘘< 8520301

NW一P X;P"VJ萎E U

TP J唄 CHÍ MINH, tháng 01 p<o 2022

E p"d瓜"j逢噂pi"f磯p"mjqc"j丑e<"TS Hoàng Minh Nam

NHI 烏M V影 LU一P"X;P"VJ萎E"U

J丑"v‒p"j丑e"xk‒p<"Piw{宇p"Vj鵜"Mko"Pi¤p MSHV: 1970650

Pi {."vj pi."p<o"ukpj<"22/04/1996 P挨k"ukpj<"D院p"Vtg

Chuyên ngành: M悦"vjw壱v"Jq "j丑e O«"u嘘<"8520301

I TÊN A陰 TÀI

Tên ti 院ng Vi羽t: Nijk‒p"e泳w"vt ej"n{"rqn{uceejctkfg"t瑛"p医o"nkpj"ejk"d茨pi"m悦"vjw壱v"CO2 siêu v噂k"j衣p"x "vj穎"pijk羽o"jq衣v"v pj"ukpj"j丑e

Tên ti 院ng Anh: Study on extracting polysaccharides from Ganoderma lucidum by

supercritical carbon dioxide and bioactivity evaluation

II NHI 烏M V影 VÀ N浦I DUNG:

2.1 V鰻pi"swcp: P医o"nkpj"ejk."rqn{uceejctkfg."jq衣v"v pj"e栄c"p医o"nkpj"ejk, m悦"vjw壱v"EQ2

uk‒w"v噂k"j衣p rj逢挨pi"rj r"8鵜pj"n逢嬰pi"polysaccharide."rj逢挨pi"rj r"vj穎"pijk羽o"jq衣v"tính ukpj"j丑e"e栄c"ecq"vt ej"và sw{"jq衣ej"vj詠e"pijk羽o

2.2 Vj詠e"pijk羽o

- A鵜pj"fcpj"p医o"nkpj"ejk

- Vt ej"n{"rqn{uceejctkfg"v瑛"p医o"ninh chi d茨pi"m悦"vjw壱v"EQ2uk‒w"v噂k"j衣p

- Mj違q"u v"違pj"j逢荏pi"e栄c"v瑛pi"8k隠w"mk羽p"trích ly 8院p"j o"n逢嬰pi"polysaccharide bao i欝o<"t益 l羽 ethanol: nguyên li羽u, nhi羽v"8瓜, th運i gian và áp su医t

- Mj違q"u v"違pj"j逢荏pi"8欝pi"vj運k"e e"{院w"v嘘 8院n hàm n逢嬰pi"polysaccharide d茨pi"sw{"jq衣ej"vj詠e"pijk羽o"vjgq"mô hình Box-Behnken

- Kh違o sát b隠 m員t p医o vt逢噂c và sau trích ly b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n

- Vj穎" pijk羽o" jq衣v" v pj" mj pi" qz{" jq " mj pi" mjw育p" x kháng vk吋w 8逢運pi" e栄c"polysaccharide

III NGÀY GIAO NHI 烏M V影:

IV NGÀY HOÀN THÀNH NHI 烏M V影:

V CÁN B 浦 J姶閏NG D郁N: TS HOÀNG MINH NAM

PGS TS NGUY右N H頴U HI蔭U

TP HCM, ngày tháng p<o"42

EèP"D浦"J姶閏PI"F郁P Vt逢荏pi"RVP"VA"AJSI"VR0JEO

CNHH & DK

VT姶雲PI"MJQC"M駅"VJW一V"JïC"J窺E VT姶云PI"A萎K"J窺E"DèEJ"MJQC A瓜e"n壱r"- V詠"fq"- J衣pj"rj¿e

1 L 云I C謂M 愛P

A吋 hoàn thành lu壱p"x<p"p {."8亥u tiên tác gi違 xin trân tr丑ng c違o"挨p"8院p"pi逢運i thân

và ikc"8·pj"8«"nw»p"swcp"v¤o."8瓜ng viên và t衣o m丑k"8k隠u ki羽n thu壱n l嬰i cho tác gi違 trong

su嘘t th運i gian th詠c hi羽n lu壱p"x<p"p {0

Tác gi違 xin chân thành c違o" 挨p" vj亥y TS Hoàng Minh Nam và th亥y PGS.TS Nguy宇n H英u Hi院w"8«"v壱p"v·pj"j逢噂ng d磯n, t衣q"8k隠u ki羽n thu壱n l嬰i cho tác gi違 trong su嘘t quá trình h丑c t壱p và th詠c hi羽n lu壱p"x<p

Tác gi違 xin g穎i l運i c違o"挨p 8院n các h丑c viên, nghiên c泳u viên và các b衣n sinh viên 荏 Phòng thí nghi羽m Tr丑pi"8k吋o"AJSI-HCM Công ngh羽 Hóa h丑c & D亥u khí (Key CEPP Lab), Vt逢運pi"A衣i H丑c Bách Khoa-AJSI TP.HCM 8«"j厩 tr嬰 tác gi違 trong su嘘t quá trình

6 TÓM T 溢T LU一P"X;P

Trong lu壱p"x<p"p { polysaccharide 8逢嬰c trích ly t瑛 n医m linh chi b茨ng k悦 thu壱t CO2

siêu t噂i h衣n0"J o"n逢嬰ng polysaccharide 8逢嬰e"z e"8鵜nh b茨ng rj逢挨pi"rj r"quang ph鰻

h医p thu phân t穎 M磯u n医m s穎 d映ng trong nghiên c泳w" 8«" 8逢嬰e" 8鵜nh danh là loài Ganoderma lucidum (n医m Linh chi 8臼)

謂pj"j逢荏ng c栄a t瑛pi"8k隠u ki羽p"vt ej"n{"pj逢"t益 l羽 ethanol: nguyên li羽u, nhi羽v"8瓜, th運i gian và áp su医t 8院p"j o"n逢嬰ng polysaccharide 8逢嬰c kh違o sát b茨pi"rj逢挨pi"rj r"nw¤p"phiên t瑛ng bi院p"8吋 tìm ra kho違ng bi院n thiên phù h嬰p0"Ucw"8„."vk院n hành kh違q"u v"8欝ng

th運i b茨ng quy ho衣ch thí nghi羽m s穎 d映ng mô hình BoxÎBehnken S嘘 li羽w"8逢嬰c x穎 lý

b茨ng ph亥n m隠o" Fgukip" Gzrgtv" 3302" 8吋 v·o" 8i隠u ki羽p" vt ej" n{" ejq" j o" n逢嬰ng polysaccharide cao nh医t

A欝ng th運i b隠 m員t n医o"vt逢噂c và sau quá trình trích ly b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n 8逢嬰e"8 pj"ik "d茨pi"rj逢挨pi"rj r"m pj"jk吋p"xk"8k羽n t穎 quét (Scan Electron Microscopy

Î SEM)

Polysaccharide thu nh壱n t衣k"8k隠u ki羽n t嘘k"逢w"8逢嬰c kh違o sát ho衣t tính sinh h丑c thông qua kh違 p<pi" mj pi" qz{" j„c" u穎 d映pi" rj逢挨pi" rj r" d逸t g嘘c t詠 do 1,1ÎdiphenylÎ1Îpicrylhydrazyl (DPPH)v噂i 8嘘i ch泳pi"f逢挨pi"n "axit ascorbic, kh違 p<pi"kháng khu育n c栄a polysaccharide 8逢嬰c th穎 nghi羽m trên Escherichia coli và Staphylococcus aureus b茨ng rj逢挨pi"rj r"8q"8逢運ng kính vòng kháng khu育nvà áp d映pi"rj逢挨pi"rj r"泳c ch院 enzyme g-glucosidase 8吋 8 pj"ik "mj違 p<pi"mj pi"vk吋w"8逢運ng

7 ABSTRACT

In this thesis, polysaccharide was extracted from Ganoderma lucidum by supercritical

CO2 technique The polysaccharide content was determined by ultravioletÎvisible spectroscopy The mushroom sample used in the study was identified as Ganoderma lucidum

The effects of each extraction conditions such as the ratio of ethanol: material, temperature, time and pressure on polysaccharide content were investigated by single - factor method to choose the impact range Then, simultaneously surveyed these four conditions by Box-Behnken design

Simultaneously, the surface of fungi before and after extraction by supercritical CO2

technique was evaluated by scanning electron microscopy

The polysaccharide obtained under optimal conditions was investigated the biological activity via the radical scavenging capacity with 1,1ÎdiphenylÎ1Îpicrylhydrazyl with ascorbic acid as a positive control and the antibacterial ability of polysaccharide was tested on Escherichia coli and Staphylococcus aureus by the diameter of the inhibition zones.Cpvkfkcdgvke"cevkxkv{"d{"g-glucosidase enzyme inhibition method

8 L 云K"ECO"AQCP

Tác gi違 zkp"eco"8qcp"nw壱p"x<p"p {"n "e»pi"trình nghiên c泳u th詠c s詠 c栄a cá nhân tác

gi違 và 8逢嬰c th詠c hi羽p"f逢噂i s詠 j逢噂ng d磯n c栄a th亥y TS Hoàng Minh Nam và PGS TS Nguy宇n H英u Hi院u, Phòng thí nghi羽m Tr丑pi"8k吋o"AJSI"JEO"E»pi"pij羽 Hóa h丑c và

D亥u khí (Key CEPP Lab+."Vt逢運pi"A衣i h丑c Bách Khoa - AJSI"VR0"JEO0

Các s嘘 li羽u, k院t qu違 nghiên c泳u trong lu壱p"x<p"p {"n "jq p"vq p trung th詠e."ej逢c"v瑛ng 8逢嬰c công b嘘 trong b医t c泳 m瓜v"e»pi"vt·pj"p q"mj e"vt逢噂e"8¤{0"M丑i s詠 ik¿r"8叡 cho vi羽c hoàn thành lu壱p"x<p"p {"8隠w"8«"8逢嬰c c違o"挨p."e e"vj»pi"vkp"vt ej"f磯n trong lu壱p"x<p"p {"8隠w"8«"8逢嬰c ch雨 rõ ngu欝n g嘘c

Tác gi違 xin ch鵜u trách nhi羽m v隠 nghiên c泳u c栄a mình

V e"ik違

Piw{宇p"Vj鵜"Mko"Pi¤p

N云K E謂O 愛P i

TÓM V溢V NW一P X;P ii

ABSTRACT iii

N云K CAM AQCP iv

O影E N影E xiii

DANH O影E HÌNH vii

DANH O影E D謂PI viii

A咽V X遺P A陰 1

EJ姶愛PI 1 V蔚PI QUAN 2

P医o linh chi 2

Ikずk vjkうw chung 2

1.1.2 Thành rjＺp jq "jがe 3

Các rj逢挨pi pháp trích ly 8

Rj⇔￢pi"rj r trích ly Soxhlet 8

Rj⇔￢pi"rj r siêu âm 9

Rj⇔￢pi"rj r siêu âm 10

Rj⇔￢pi"rj r trích ly dｊpi n⇔w ejＸv"uk‒w vずk jＴp 11

1.4 O映e tiêu, p瓜k dung, rj逢挨pi pháp nghiên e泳w tính o噂k và 8„pi góp e栄c nw壱p x<p 16

Oつe tiêu nghiên eとw 16

1.4.2. Pじk dung 16

1.4.3. Rj⇔￢pi"rj r nghiên eとw 17

1.4.4. Tính oずk eてc"nwｆp x<p 21

1.4.5. A„pi góp eてc nwｆp x<p 22

EJ姶愛PI 2 VJ衛E PIJK烏O 23

Hoá ej医v f映pi e映 vjk院v d鵜 và 8鵜c 8k吋o vj詠e jk羽p 23

Jq "ejＸv 23

Fつpi eつ"x vjkｘv dお 23

Vj "pijk羽o 24

2.2.2. MjＶq sát uば Ｖpj"j⇔ぞpi eてc các {ｘw vぐ 8ｘp hàm n⇔ぢpi polysaccharide 25

2.2.3. Phân tích eＸw trúc nguyên nkうw vt⇔ずe và sau trích ly 25

2.2.4. Vjぬ pijkうo jqＴv tính sinh jがe"eてc"rqn{uceejctkfg 29

謂pj"j逢荏pi e栄c các {院w v嘘 8院p hàm n逢嬰pi GPLs 34

3.2.1. Ｕpj"j⇔ぞpi eてc vなpi {ｘw vぐ 34

3.2.2. Ｕpj"j⇔ぞpi 8げpi vjぜk các {ｘw vぐ 37

3.2.3. Akｚw"mkうp vぐk ⇔w cho quá trình trích ly polysaccharide 45

D隠 o員v nguyên nk羽w vt逢噂e và sau khi trích ly 46

3.4 Jq衣v tính sinh j丑e 48

3.4.1. JqＴv tính kháng oxy hoá 47

3.4.2. JqＴv tính mj pi"mjwｂp 47

3.4.3. でe ejｘ enzyme g-glucosidase 48

EJ姶愛PI 4 M蔭V NW一P 50

FCPJ"O影E"EèE"EðPI"VTîPJ"MJQC"J窺E 51

VÉK"NK烏W"VJCO"MJ謂Q 94

RJ影 N影E 99

9 DANH M 影C HÌNH

Hình 1.1: N医o"nkpj"ejk"8臼 (Ganoderma lucidum) 3

Hình 1.2: C医u trúc c栄a GPLs 4

Hình 1.3: E挨"ej院 kháng oxy hóa c栄a các polysaccharide 6

J·pj"306<"E挨"ej院 kháng khu育n c栄a polysaccharide 7

Hình 1.5: 永c ch院 c- glucosidase giúp h衣 8逢運ng huy院t 7

Hình 1.6: H羽 th嘘ng Soxhlet 8

Hình 1.7: H羽 th嘘ng siêu âm 9

Hình 1.8: M瓜t s嘘 lo衣k"gp|{og"vj逢挨pi"o衣i 10

Hình 1.9: Gi違p"8欝 pha c栄a CO2 13

Hình 1.10: *c+"Vjk院v"d鵜"ej pj."*d+"d挨o"8欝pi"fwpi"o»k."*e+"d瓜"8k隠w"mjk吋p"x ""*f+"j羽"vj嘘pi" làm n衣pj 15

Hình 1.11: Mô hình Box-Behnken 18

J·pj"3034<"U挨"8欝 piw{‒p"n#"o {"8q"rj鰻 UVÎVis 19

Hình 1.13: C医u t衣o thi院t b鵜 SEM 19

Hình 1.14: Ph違n 泳ng m医t màu c栄a DPPH v噂i ch医t kháng oxy hoá 20

Hình 1.15: Nguyên t逸c th穎 nghi羽m ho衣t tính kháng ti吋w"8逢運ng 21

Hình 2.1: Quy trình trích ly polysacchride t瑛 n医m linh chi 25

Hình 2.2: Quy trình th穎 nghi羽m ho衣t tính kháng oxy hóa 30

Hình 3.1: K院t qu違 PCR v噂i c員p primer ITS1/ITS4 32

Hình 3.2: a) K院t qu違 uq"u pj"8瓜 v逢挨pi"8欝ng c栄a m磯u v噂i các trình t詠 có s印n trên genBank và b) K院t qu違 uq"u pj"8瓜 v逢挨pi"8欝ng gi英a m磯u n医m v噂i trình t詠 loài Ganoderma lucidum có mã genBank AB733175.1 33

Hình 3.3: 謂pj"j逢荏ng c栄a t益 l羽 gvjcpqn<piw{‒p"nk羽w 34

Hình 3.4: 謂pj"j逢荏ng c栄a nhi羽v"8瓜 35

Hình 3.5: 謂pj"j逢荏ng c栄a th運i gian 36

Hình 3.6: 謂pj"j逢荏ng c栄a áp su医t 36

Hình 3.7: 謂pj"ju逢荏pi"8欝ng th運i c栄a t益 l羽 ethanol:nguyên li羽u và nhi羽v"8瓜 40

Hình 3.8: 謂pj"j逢荏pi"8欝ng th運i c栄a th運i gian và t益 l羽 ethanol:nguyên li羽w""8院n hàm n逢嬰ng GPLs 41

Hình 3.9: 謂pj"j逢荏pi"8欝ng th運i c栄a áp su医t và t益 l羽 ethanol: nguyên li羽w""8院p"j o"n逢嬰ng GPLs 42

Hình 3.10: 謂pj"j逢荏pi"8欝ng th運i c栄a th運i gian và nhi羽v"8瓜 8院n 43

Hình 3.11: 謂pj"j逢荏pi"8欝ng th運i c栄a áp su医t và nhi羽v"8瓜 8院p"j o"n逢嬰ng GPLs 44

Hình 3.12: 謂pj"j逢荏pi"8欝ng th運i c栄a áp su医t và th運k"ikcp"8院p"j o"n逢嬰ng GPLs 45

Hình 3.13: 謂nh SEM c栄a m磯u n医o"nkpj"ejk"vt逢噂c khi trích ly (a), (b) và sau khi trích ly b茨ng CO2 siêu t噂i h衣n (c), (d) 46

Hình 3.14: Kh違 p<pi"d逸t g嘘c t詠 do DPPH c栄a a) Aekf"cueqtdke"x "d+"Polysaccharide 47 Hình 3.15: Vùng 泳c ch院 (a) S aureus, (b) E coli và (c) bi吋w"8欝 8逢運ng kính vòng kháng khu育n 48

Hình 3.16: Ho衣t tính 泳c ch院 gp|{og"g-glucosidase c栄a cao trích 49

DANH M 影C B謂NG

B違ng 2.1: Tr衣ng thái t噂i h衣n c栄a s嘘 c栄a m瓜t s嘘 n逢w"ej医t 12

B違ng 2.2: So sánh kh嘘k"n逢嬰pi"tk‒pi."8瓜 nh噂v."8瓜 phân tán gi英a ch医t khí, dung môi siêu t噂i h衣n và ch医t l臼ng 13

B違ng 2.1: Các hóa ch医t s穎 d映ng 23

B違ng 2.2: Các d映ng c映 và thi院t b鵜 s穎 d映ng 23

B違ng 2.3: Các y院u t嘘 kh違o sát 26

B違ng 2.4: Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a t益 l羽 ethanol: nguyên li羽u 26

B違ng 2.5: Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a nhi羽v"8瓜 27

B違ng 2.6: Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a th運i gian trích ly 27

B違ng 2.7: Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a áp su医t 27

B違ng 2.8: B違ng b嘘 trí thí nghi羽m 28

B違ng 3.1: K院t qu違 thi院t k院 thí nghi羽m theo mô hình Box - Behnken 37

B違ng 3.2: K院t qu違 phân tích ANOVA 38

DANH M 影C CH頴 VI蔭T T溢T

V瑛"xk院v"v逸v Vk院pi"Cpj Vk院pi"Xk羽v

BBD Box-Behnken Design Mô hình Box-Behnken

G lucidum Ganoderma lucidum P医o"nkpj"ejk

10 A咽T V遺P"A陰

Theo d詠 8q p c栄a T鰻 ch泳c Y t院 th院 gi噂i (WHO) 8院p"p<o"4252"u胤 có thêm 20,3 tri羽u

ca m逸e"wpi"vj逢"o噂i và 13,2 tri羽u ca t穎 vong Ngoài ra, tình tr衣ng vi khu育n kháng kháng ukpj"e pi"v e"8瓜pi"8 pi"m吋 8院n t益 l羽 ikc"v<pi"e e"d羽nh truy隠n nhi宇m0"Vjgq"YJQ."逢噂c tính vtqpi"p<o"4237"8«"có kho違pi"550332"pi逢運i t穎 vong 荏 châu Âu do nhi宇m khu育n kháng kháng sinh và kháng thu嘘c Trên th院 gi噂i m厩k"p<o có kho違pi"9220222"pi逢運i t穎 vong do m逸c b羽nh truy隠n nhi宇o"nk‒p"swcp"8院n các ch栄ng vi khu育p"pj逢"Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, D詠 báo 8院p"p<o"4272."v·pj"vt衣ng vi khu育n kháng kháng sinh là nguyên nhân khi院n kho違ng 10 tri羽w"pi逢運i t穎 vong Các rj逢挨pi"rj r"jk羽p"8衣i dùng trong 8k隠u tr鵜 e e"e<p"d羽nh nêu trên tuy mang l衣i hi羽u qu違

ch英a tr鵜, song kh違 p<pi" r"f映ng v磯n còn h衣n ch院 fq"8k隠u ki羽n kinh t院 khác nhau 荏 m厩i

qu嘘c gia, l衣i gây nhi隠u tác d映ng ph映 cho b羽nh nhân và 違pj"j逢荏pi"o»k"vt逢運ng0"Fq"8„."

vi羽c tìm ra các h嬰p ch医t ÐzcpjÑ"có kh違 p<pi"pi<p"pi瑛a và nâng cao s泳e"8隠 kháng c栄a e挨"vj吋 là r医t c亥n thi院t M瓜t s嘘 nghiên c泳u cho th医y các h嬰p ch医t t瑛 th詠c v壱t có kh違 p<pi"kháng virus, kháng khu育p."v<pi"e逢運ng s泳e"8隠 kháng, 泳c ch院 t院 d q"wpi"vj逢, M瓜t trong

s嘘 các loài th違q"f逢嬰c quý n鰻i b壱c có ho衣t tính sinh h丑c là n医o"nkpj"ejk."8¤{"e pi"n "nq衣i cây thu嘘c 8逢嬰c s穎 d映ng ph鰻 bi院n trong y h丑c c鰻 truy隠n c栄a Vi羽t Nam E e"f逢嬰c ch医t trong n医m linh chi vj逢運pi"8逢嬰c trích ly b茨pi"rj逢挨pi"rj r"vtw{隠n th嘘ng s穎 d映ng dung môi h英w"e挨"jq員e"p逢噂c nóng, nj逢pi"pj英pi"rj逢挨pi"rj r"này có nhi隠u h衣n ch院 pj逢"hi羽u

qu違 trích ly th医p, làm bi院n tính các ho衣t ch医t, t欝n f逢"các dung môi h英w"e挨"8瓜c trong s違n

ph育o"vjw"8逢嬰c Rj逢挨pi"rj r"vt ej"n{"EQ2 siêu t噂i h衣n s穎 d映ng dung môi CO2 có 逢w"8k吋m pj逢"dung môi s衣ch, an toàn, ít t嘘n kém, không b逸t l穎c."mj»pi"8瓜c, thân thi羽n v噂i o»k"vt逢運ng, không gây ô nhi宇m0"Fq"8„."rj逢挨pi"rj r trích này 8逢嬰c l詠a ch丑p"8吋 phân tách các c医u t穎 mong mu嘘p"o "mj»pi"8吋 l衣i các ch医t th違i, t衣p ch医t 8瓜c h衣i trong quá trình trích ly và gi違m thi院u các r栄i ro v隠 s詠 bi院n tính vì nhi羽t cho các s違n ph育m trong quá trình trích Trích ly b茨pi"n逢w"ej医t siêu t噂i h衣n có th吋 thay th院 kh違 quan cho các rj逢挨pi"rj r"u穎 d映pi"fwpi"o»k"vj»pi"vj逢運ng trong các quá trình trích ly và s違n xu医t các s違n ph育m th違o f逢嬰c0"A欝ng th運i, CO2 siêu t噂i h衣n là fwpi"o»k"ÐzcpjÑ"x "thích h嬰p cho quá trình trích ly và phân tách các thành ph亥n e„"f逢嬰c tính t瑛 các cây thu嘘c quý Vì

v壱{."8隠 v k"p {"8逢嬰c th詠c hi羽n v噂k"vk‒w"8隠 ÐNghiên c泳u trích ly polysaccharide t瑛 n医m

linh chi b 茨ng k悦 thu壱t CO 2 siêu t 噂i h衣n và th穎 nghi羽m ho衣t tính sinh h丑cÑ

T 蔚NG QUAN

N 医m linh chi

Giずi thiうu chung

Vtqpi"ÐD違n th違q"e逢挨pi"o映eÑ"e栄a 8衣i danh y Lý Th運i Trân, n医m linh chi 8逢嬰c phân

lo衣i theo màu s逸c, chia thành 6 lo衣i g丑k"n "ÐN映c B違q"nkpj"ejkÑ"dcq"i欝m thanh chi (ho員c long chi Î linh chi màu xanh), h欝ng chi (hay còn g丑k"n "z ej"ejk."8cp"ejk"Î linh chi màu

h欝pi."8臼), hoàng chi (hay kim chi Î màu vàng), b衣ch chi (màu tr逸ng), h逸c chi (hay huy隠n chi Î o w"8gp+"x "v穎 chi (t泳c linh chi có màu tím)

Chi Ganoderma trên th院 gi噂k"e„"vt‒p"472"nq k."pj逢pi"ch雨 có sáu lo衣i là lkpj"ejk"8臼, 8gp."zcpj."vt逸ng, vàng và tím 8逢嬰c nghiên c泳u và ch雨 ra r茨ng có nhi隠u l嬰i ích cho s泳c

kh臼e Trong s嘘 8„."nkpj"ejk"8gp"*G sinensis) và lkpj"ejk"8臼 (G lucidum) có kh違 p<pi"

b欝i b鰻, v<pi"e逢運ng s泳c kh臼g"8 pi"m吋 nh医t [1] N医m linh chi (hay linh chi th違o) còn có tên g丑i khác là tiên th違o, n医m vt逢運ng th丑, phân b嘘 kh逸r"p挨k"vt‒p"vj院 gi噂i, ch栄 y院u là vùng nhi羽v"8噂i và c壱n nhi羽v"8噂k"pj逢"D逸c M悦 và châu Á (vtqpi"8„"e„"Xk羽t Nam) N医m linh chi vj逢運ng kí sinh hay ho衣i sinh trên nhi隠u lo衣i cây ho員c phát tri吋n trên các giá th吋 g厩 m映c

Ch医v"n逢嬰ng c栄a n医m ph映 thu瓜c vào thành ph亥p"fkpj"f逢叡pi"p挨k"ej¿pi"u嘘ng [2, 3] N医m linh chi g欝m hai ph亥n chính: o "p医m và th吋 qu違 O "p医m d衣ng th壱n Î g亥p"vt p."8»k"mjk"xòe hình qu衣t M員v"vt‒p"o "p医m có vân g衣ej"8欝ng tâm, n院r"pj<p"v臼a ra, màu s逸c t瑛 vàng chanh Î vàng ngh羽 Î vàng nâu Î vàng cam Î 8臼 nâu Î nâu tím và nh印n bóng pj逢"8 pj"vecni Khi già, o "s磯m màu, l噂p v臼 láng x "f {"j挨p, trên b隠 m員t ngày có nhi隠u l噂p ph医n 8臼 nâu (chính là bào t穎 n医m)0"M ej"vj逢噂e"o "p医o"vj逢運ng 5-12 cm, dày 0,8-3,3 cm Ph亥n

th吋 qu違 màu nâu, m隠m x嘘p, ch泳a cu嘘ng n医m, d亥n hóa g厩 theo th運i gian Cu嘘ng n医m dài

ho員c ng逸n."8 pj"n羽ch."vj逢運ng hình tr映, 8逢運ng kính 0,5-3 cm, chi隠u dài t瑛 6-10 cm Cu嘘ng

n医o"vj逢運ng có khi rj¤p"pj pj."8»k"mjk"w嘘n khúc cong L噂p v臼 cu嘘pi"o w"8臼 Î p¤w"8臼

Î p¤w"8gp."d„pi0"Rj亥p"8雨nh cu嘘pi"vj逢運ng g欝 lên ho員e"j挨k"n o Ók"vj挨o"pj姻, v鵜 8逸ng [4] Hình 1.1 là 違nh ch映p c栄a n医m linh chi

Hình 1.1: N医o"nkpj"ejk"8臼 (Ganoderma lucidum)

N医o"nkpj"ejk"8臼 hay h欝ng chi, có danh pháp khoa h丑c là Ganoderma lucidum, thu瓜c

h丑 N医m g厩 Ganodermataceae [1] 雲 Hàn Qu嘘c và Trung Qu嘘c, n医o"p {"8逢嬰c g丑i tên

là ÐlingziÑ."荏 Nh壱t B違p"8逢嬰c g丑k"n "ÐreishiÑ"jc{"ÐmannentakeÑ."e„"#"pij c"n "vj違o m瓜c

c栄c"vt逢運ng sinh và b医t t穎 Phân lo衣i khoa h丑c c栄a n医o"nkpj"ejk"pj逢"ucw<

Gi噂i (regnum): N医m (Fungi)

Ngành (phylum): N医o"8違m (Basidiomycota)

L噂p (class): N医o"8違m (Agaricomycetes)

B瓜 (ordo): N医o"8c"v亥ng (Polyporales)

H丑 (familia): N医m lim (Ganodermataceae)

Chi (genus): N医m linh chi (Ganoderma)

Loài (species): N医m linh chi - Ganoderma lucidum

Thành phＺn hoá hがc

N医m linh chi ch泳a r医t nhi隠w"p逢噂c, chi院m 90% tr丑ng n逢嬰ng 10% còn l衣i bao g欝m protein (10 Î 40%), ch医t béo (2 Î 8%), carbohydrate (3 Î 28%), ch医v"z挨"*5"Î 32%), tro (8 Î 10%) và m瓜t s嘘 vitamin và khoáng ch医v"pj逢"mcnk."ecpzk."rj嘘t pho, magiê, selen, s逸t,

k胤o"x "8欝ng [5]

Ngoài ra, n医m linh chi còn ch泳c" 8c" f衣ng các h嬰p ch医t có tính sinh h丑e" pj逢"glycoprotein, polysaccharide, terpenoid, steroid, phenol, nucleotide và các d磯n xu医t c栄a chúng Trong s嘘 8„."rqn{uceejctkfg."rgrvkfqin{ecp"x "vtkvgtrgp"n "dc"vj pj"rj亥n chính

có ho衣t tính sinh h丑c e„"j o"n逢嬰ng cao 8逢嬰c tìm th医y nhi隠u trong n医m linh chi [6, 7]

1.1.2.1 Polysaccharide

Polysaccharide là các phân t穎 hydrocacbon cao phân t穎 có s詠 8c"f衣ng v隠 c医u trúc, 8員c tính hóa lý và ho衣t tính sinh h丑c Trong n医m linh chi, polysaccharide chi院m kho違ng 10% kh嘘k"n逢嬰ng khô H嬰p ch医t polysaccharide t瑛 n医m linh chi (GPLs) r医v"8c"f衣ng v隠

c医u trúc phân t穎, tr丑pi"n逢嬰ng phân t穎 l噂n, ho衣t tính sinh h丑e"x "8逢嬰c tìm th医y trong h亥u

h院t các b瓜 ph壱n c栄a n医m (th吋 qu違, bào t穎 và s嬰i n医m) [8] Có trên 200 lo衣i polysaccharide 8«"8逢嬰c tìm th医y."vtqpi"8„"2 lo衣i ch栄 y院u là galactan và glucan H嬰p ch医t GPLs có th吋

j c"vcp"vtqpi"p逢噂c, axit y院u ho員c dc|挨"{院w."pj逢pi"mj»pi"vcp"vtqpi"e e"fwpi"o»k"j英u e挨"pj逢"t逢嬰u, ete, acetone [9]

Polysaccharide trong n医m linh chi có hàng lo衣t các ho衣t tính sinh h丑c quý giá, bao

g欝m an th亥n, ch嘘pi"uw{"pj逢嬰c th亥n kinh kéo dài, ch嘘ng béo phì, ch嘘ng m医t ng栄, ch嘘ng viêm, h衣 8逢運ng huy院t, ch嘘ng loét, ch嘘ng uni"vj逢"x "v<pi"e逢運ng mi宇n d鵜ch [10] Trong

s嘘 e e"rqn{uceejctkfg"8逢嬰c thu nh壱n t瑛 n医o"nkpj"ejk."8 pi"ej¿"#"pj医t là nhóm glucan Glucan có liên k院v" "* Î glucan) cho ho衣t tính sinh h丑c cao, có l嬰i cho s泳c kh臼e con

pi逢運i [11, 12] Phân t穎 Î glucan là m瓜t chu厩i các phân t穎 D Î glucose liên k院t b荏i liên

k院t (1,3) Î "jc{"*3.8+ Î 0"Nhi隠u nghiên c泳w"8«"ej泳ng minh kh違 p<pi"v<pi"e逢運ng mi宇n

d鵜ch c栄c" -glucan và 泳ng d映pi"8吋 h厩 tr嬰 8k隠u tr鵜 m瓜t s嘘 b羽pj"pj逢"wpi"vj逢."d羽nh truy隠n nhi宇m, b羽nh ti吋w"8逢運ng và b羽nh tim m衣ch [13, 14] C医u trúc hóa h丑c c栄c" Î glucan

8逢嬰e"vt·pj"d {"pj逢"荏 hình 1.2

Hình 1.2: C医u trúc c栄a GPLs A«"e„"pjk隠u công trình nghiên c泳w"8逢嬰c ti院n hành v噂i m映e"8 ej"vt ej"n{."mj違o sát

ho衣t tính sinh h丑c c栄a GPLs trong n医m linh chi K院t qu違 8隠u cho th医y GPLs trong n医m linh chi có nhi隠u tác d映ng 泳c ch院 mi宇n d鵜ch, ch嘘pi"wpi"vj逢."mj pi"xk‒o."rj pi"x "8k隠u

tr鵜 các b羽nh tim m衣ch, ch嘘ng virus và kháng khu育n [15] G亥p"8¤{."IRNu"8逢嬰c xem là

tác nhân kháng oxy hóa và kháng khu育n h英u hi羽w"vtqpi"8k隠u ki羽n in vitro và in vivo b荏i

kh違 p<pi"d逸t g嘘c t詠 fq"x "mj pi"8逢嬰c nhi隠u lo衣i virus vi khu育n gây h衣i

Ch医t kháng oxy hóa hay còn g丑i là Ðch医t b逸t g嘘c t詠 doÑ ik¿r"pi<p"ej員n quá trình oxy hóa di宇n ra thông qua vi羽c trung hòa các g嘘c t詠 do Ch医v"mj pi"qz{"j„c"8逢嬰c chia làm hai lo衣i: ch医t kháng oxy hóa t鰻ng h嬰p và kháng oxy hoá t詠 nhiên M瓜t s嘘 ch医t ch嘘ng oxy hóa t鰻ng h嬰r"vj逢運pi"8逢嬰c s穎 d映ng là butylated hydroxytoluene (BHT), butylated hydroxyanisole (BHA), propyl gallate và tertbutylhydroquinine Tuy nhiên, các ch医t kháng oxy t鰻ng h嬰p có th吋 gây ra các v医p"8隠 s泳c kh臼g"pj逢"v鰻p"vj逢挨pi"icp"x "mj違 p<pi"i¤{"wpi"vj逢0"Fq"8„."e e"ej医v"mj pi"qz{"j„c"cp"vq p"j挨p, có ngu欝n g嘘c t瑛 t詠 pjk‒p"8逢嬰c 逢w"vk‒p"s穎 d映ng Ch医t kháng oxy hóa 8c"u嘘 có tính kh穎."8„pi"xck"vt "pj逢"pj英ng tác nhân

b逸t g嘘c t詠 do, giúp làm quá trình oxy hóa gây h衣i [5] Hình 1.3 mô t違 e挨"ej院 kháng oxy hoá c栄a polysaccharide

Hình 1.3: E挨"ej院 kháng oxy hóa c栄a các polysaccharide 1.1.3.2 HoＴt tính kháng khuｂn

Rqn{uceejctkfg"n o"vjc{"8鰻i tính th医m c栄a thành t院 bào, làm bi院n d衣ng và phá v叡 thành t院 bào vi khu育n.Pj逢"vj吋 hi羽n trong hình 1.4, 荏 o»k"vt逢運ng pH bên trong c栄a vi khu育n (~ 7,0), polysaccharide chuy吋n t瑛 không phân ly sang phân ly, gi違i phóng H+ và anion, khi院n pH bên trong c栄a vi khu育n gi違m Các vi khu育n nh衣y c違m v噂i pH s胤 không

ch嘘ng ch鵜w"8逢嬰c s詠 chênh l羽ch pH bên trong và bên ngoài Vi羽c h衣 th医r"8瓜 pH trong t院 bào làm gi違m ho衣v"8瓜ng c栄a enzyme pyruvate decarboxylase - enzyme tham gia vào quá trình chuy吋p"j„c"p<pi"n逢嬰pi0"A吋 t欝n t衣i, vi khu育n bu瓜c ph違i s穎 d映pi"p<pi"n逢嬰pi"8吋 8育y proton ra ngoài qua màng Hi羽p"v逢嬰ng này khi院n tiêu t嘘p"p<pi"n逢嬰pi"x "pi<p"ej員n s詠 phát tri吋n c栄a vi khu育n ho員c gi院t ch院t vi khu育n Ngoài ra, pH gi違o"e pi"pi<p"ej員n các enzyme (ví d映 pj逢"fgectdqz{ncug"x "ej医t xúc tác), 泳c ch院 sw "vt·pj"8逢運ng phân [14]

Hình 1.4<"E挨"ej院 kháng khu育n c栄a polysaccharide 1.1.3.3 HoＴt tính とc chｘ enzyme c- glucosidase

Enzyme g-amylase gi英 vai trò quan tr丑ng trong quá trình chuy吋n hoá tinh b瓜t thành

h厩n h嬰p maltose, maltotriose x "g- (1Î8+"x "g- (1Î4) oligoglucan Enzyme g-glucosidase

ti院p t映c phân gi違i h厩n h嬰p này, t衣o vj pj"inwequg"8k"x q"vw亥n hoàn máu Quá trình chuy吋n hoá cacbohydrate s胤 b鵜 trì hoãn do s詠 hi羽n di羽n c栄a các enzyme 泳c ch院, d磯p"8院n gi違m

m泳e"8逢運ng huy院t trong máu [19]0"Fq"8„."泳c ch院 enzyme g-glucosidase 8逢嬰c xem là

m映c tiêu quan tr丑ng trong 8k隠u tr鵜 b羽nh ti吋w"8逢運ng tuýp 4"pj逢"vj吋 hi羽n trong hình 1.5

Hình 1.5: 永c ch院 c- glucosidase giúp h衣 8逢運ng huy院t Polysaccharide bao g欝m thành ph亥n monosaccharide và liên k院t glycosidic, có ho衣t tính 泳c ch院 enzyme g-glucosidase [20] Nghiên c泳w" vt逢噂e" 8¤{" 8«" ej雨 ra r茨ng

c-H 医p

V<pi"8逢運ng 院

c-Maltose, maltotriose và g- (1 Î6) và g- (1Î4) oligoglucans

Glucos

Tinh b 瓜t c-

永c ch院

永c 院

H 医p

M 泳e"8逢運ng huy院t bình vj逢運

polysaccharide t瑛 lá m壱n ch栄 y院u bao g欝m Gal, Ara, Xyl và Glc 泳c ch院 50% kh違 p<pi"

ho衣v" 8瓜ng c栄a enzyme g-glucosidase 荏 n欝pi" 8瓜 1 mg/mL K院t qu違 này cho th医y polysaccharide ti隠o"p<pi"vtqpi"xk羽c 泳c ch院 enzyem g-glucosidase

N医m linh chi ch泳a nhi隠u ho衣t ch医t sinh h丑c có l嬰i cho s泳c kho飲 eqp"pi逢運i Fq"8„,

t瑛 xa z逢c."eqp"pi逢運k"8«"bi院t s穎 d映ng n医m linh chi pj逢"o瓜t v鵜 thu嘘c quý trong các bài thu嘘c ch英a tr鵜 x "8逢嬰c trích nóng (s逸c thu嘘c) Tuy nhiên, s穎 d映pi"rj逢挨pi"rj r"vt ej"nóng này khi院n n医m linh chi nói riêng và các lo衣i th違q"f逢嬰c nói chung s胤 không th吋 mang l衣i hi羽u qu違 cao, t嘘n kém nguyên li羽u Vì v壱y, c亥n ph違i nghiên c泳w"8吋 tìm ra các rj逢挨pi"rj r"vt ej"n{"jk羽p"8衣i giúp thu nh壱n t嘘k"8c"các s違n ph育m có ho衣t ch医t sinh h丑c quý có trong các lo衣k"f逢嬰c li羽u

E e"rj逢挨pi"rj r"vt ej"n{

Rj⇔￢pi"rj r"vt ej"n{"Uqzjngv

H羽 th嘘pi"vt ej"Uqzjngv"8逢嬰c ch院 t衣o m瓜t cách th栄 công, bao g欝m 3 b瓜 ph壱n là bình

c亥w"8員t trong b院r"8wp."嘘ng ch泳a b瓜v"e¤{"e„"4"pj pj"8吋 d磯n dung môi và d磯n d鵜ch trích, 嘘pi"jq p"n逢w0"E違 3 b瓜 ph壱p"p {"vj q"t r"8逢嬰c t衣i v鵜 vt "p¿v"o k0"U挨"8欝 nguyên lý và h羽

th嘘pi"vt ej"Uqzjngv"8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 hình 1.6

Hình 1.6: H羽 th嘘ng Soxhlet

Nguyên t 逸c: Nguyên li羽u c逸t nh臼 ho員c xay thô ch泳c"vtqpi"v¿k"zkrjqpi"8逢嬰e"8員t tr詠c

ti院p trong 嘘ng ch泳a m磯u Dwpi"o»k"8逢嬰c ch泳a trong bình c亥u 荏 d‒p"f逢噂k0"Ak隠u ch雨nh

b院r"8wp"8吋 dung môi sôi nh姻 8隠u, b嘘e"j挨k"n‒p"ecq"vjgq"pj pj"n噂n th医o"逢噂t m磯u và d鵜ch trích sinh ra s胤 theo nhánh nh臼 j挨p"ej違y vào l衣i bình c亥u B院p v磯n ti院p t映e"8wp."fwpi"

môi tinh khi院t l衣k"8逢嬰c b嘘e"j挨k"và tách các h嬰p ch医t h英w"e挨"tc"mj臼i m磯u Quá trình này

di宇n ra tu亥p"jq p"ejq"8院n khi b瓜v"e¤{"8逢嬰c trích ki羽t

⇒w"8kあm:

ろ Vt ej"8逢嬰c ho衣t ch医t t嘘k"8c"v逢挨pi"泳ng v噂i nhi羽v"8瓜 z e"8鵜nh;

ろ H衣n ch院 8逢嬰c th吋 tích dung môi t嘘k"8c"*vjw壱n l嬰i cho quá trình x穎 lý k院 ti院p);

ろ D宇 dàng xác 8鵜nh tín hi羽u d瑛ng;

Pj⇔ぢe"8kあm:

ろ N逢嬰ng m磯u nh臼 (kho違pi"x k"ico"8院n vài ch映c gam);

ろ Nhi羽v"8瓜 t衣i bình trích cao (b茨ng nhi羽v"8瓜 8wp+."vj運i gian trích dài, ho衣t ch医t có

kh違 p<pi"d鵜 phân h栄y;

ろ S穎 d映ng dung môi h英w"e挨"i¤{"8瓜e"8嘘i v噂k"eqp"pi逢運i và không thân thi羽n v噂i o»k"vt逢運ng [21]

Rj⇔￢pi"rj r"uk‒w"¤o

U„pi"uk‒w"¤o"n "u„pi"e挨"j丑c hình thành do s詠 lan truy隠p"fcq"8瓜ng c栄a các ph亥n t穎 trong không gian có t亥n s嘘 l噂p" j挨p" gi噂i h衣p" pi逢叡pi" eqp" pi逢運i nghe th医{" 8逢嬰c (16-18 kHz) Ngoài ra, sóng siêu âm có b違n ch医t là sóng d丑e"jc{"u„pi"pfip."pij c"n "vtqpi"vt逢運ng siêu âm các ph亥n t穎 fcq"8瓜pi"vjgq"épi"rj逢挨pi"x噂k"rj逢挨pi"vtw{隠n sóng Hình 1.7 mô t違 s詠 khu院ch tán ho衣t ch医t vào dung môi và b吋 siêu âm t衣i PTN Tr丑pi"8k吋m AJSI-HCM Công ngh羽 Hóa h丑c và D亥u khí

Hình 1.7: H羽 th嘘ng siêu âm

Nguyên t 逸c: S穎 d映ng sóng siêu âm truy隠n trong dung d鵜ch ch医t l臼ng, theo trình t詠

v噂i t嘘e"8瓜 rung cao làm cho dung môi t衣i các h嘘c nh臼 f逢嬰c li羽u có hi羽p"v逢嬰ng s栄i b丑t

Khi nh英ng b丑t bong bóng này v叡 荏 nh英pi"p挨k"i亥n thành t院 bào, thì sóng sung kích s胤 làm v叡 thành t院 bào và khu院ch tán các thành ph亥n ho衣t ch医t vào dung môi

Hình 1.8: M瓜t s嘘 lo衣i enzyme vj逢挨pi"o衣i

Nguyên t 逸c: S穎 d映ng các enzyme pj逢"egnnwnqug."g-amilase, pectinase, chitinase ho員c

h厩n h嬰p các enzyme 8吋 phá v叡 thành t院 bào vtqpi"d逢噂c ti隠n x穎 lý nguyên li羽u Vi羽c phá

v叡 thành t院 bào giúp gi違i phóng và khu院ch tán các ho衣t ch医t vào dung môi trích ly

⇒w"8kあm:

ろ Ti院t ki羽m th運i gian trích ly;

ろ Hi羽u su医t trích cao

Pj⇔ぢe"8kあm:

ろ T嘘n kém;

ろ Các enzyme có th吋 th栄y phân m瓜t s嘘 nhóm ho衣t ch医t 8 ej pj逢"rqn{uceejctkfg, rjgpqn."uvgtqkf.È [24, 25]

Rj⇔￢pi"rj r"vt ej"n{"dｊpi"n⇔w"ejＸt siêu tずi hＴn

1.2.4.1 TrＴng thái tずi hＴn cてc"n⇔w"ejＸt

B医t k fwpi"o»k"p q"e pi"u胤 8衣t tr衣ng thái siêu t噂i h衣n n院u t欝n t衣i 荏 nhi羽v"8瓜 và áp

su医t trên giá tr鵜 t噂i h衣p0"A嘘i v噂i m厩i ch医v."f逢噂i m厩i m瓜v"8k隠u ki羽n nh医v"8鵜nh, ch医v"8„"s胤

t欝n t衣i 荏 m瓜t trong ba tr衣ng thái sau: r逸n, l臼ng ho員c khí Khi nén ch医t khí t噂i m瓜t áp su医t 8栄 cao, ch医t khí s胤 hóa l臼ng Tuy nhiên, t欝n t衣i giá tr鵜 áp su医t mà 荏 8„."p院u nâng d亥n nhi羽v"8瓜 lên thì ch医t l臼pi"e pi"mj»pi"vj吋 tr荏 v隠 tr衣pi"vj k"mj "o "t挨k"x o m瓜t vùng

tr衣pi"vj k"8員c bi羽t g丑i là tr衣ng thái siêu t噂i h衣n V壱t ch医t 荏 tr衣ng thái này mang nhi隠u 8員c tính c栄a c違 ch医t khí và ch医t l臼pi."pij c"n "fwpi"o»k"8„"ocpi"v pj"vtwpi"ikcp"ik英a khí và l臼ng

1.2.4.2 TrＴng thái siêu tずi hＴn cてc"n⇔w"ejＸt

Tr衣pi"vj k"n逢w"ej医t 荏 8k隠u ki羽n nhi羽v"8瓜 và áp su医v"ecq"j挨p"pjk羽v"8瓜 t噂i h衣n (Tc) và

áp su医t t噂i h衣n (Pc), các giá tr鵜 này c栄a m瓜t s嘘 fwpi"o»k"8逢嬰c trình bày 荏 b違ng 1.1

B違ng 1.1: Tr衣ng thái t噂i h衣n c栄a s嘘 c栄a m瓜t s嘘 n逢w"ej医t

Dung môi

Kh 嘘k"n逢嬰ng phân t 穎 (g/mol)

D c (g/cm 3 ) (MPa) (atm)

Carbon dioxide (CO2) 44,01 304,1 7,38 72,8 0,469 P逢噂c (H2O) 18,015 647,1 22,06 217,76 0,322 Methane (CH4) 16,04 190,4 4,60 45,4 0,162 Ethane (C2H6) 30,07 305,3 4,87 48,1 0,203 Propane (C3H8) 44,09 369,8 4,25 41,9 0,217 Ethylene (C2H4) 28,05 282,4 5,04 49,7 0,215 Propylene (C3H6) 42,08 364,9 4,60 45,4 0,232 Methanol (CH3OH) 32,04 512,6 8,09 79,8 0,272 Ethanol (C2H5OH) 46,07 513,9 6,14 60,6 0,276 Acetone (C3H6O) 58,08 508,1 4,70 46,4 0,278

1.2.4.3 Tính chＸt cてc"n⇔w"ejＸt siêu tずi hＴn

Dung môi 荏 tr衣ng thái siêu t噂i h衣n có tính ch医t c栄a l臼ng và khí, không có s詠 phân chia pha l臼ng hay khí T衣i tr衣ng thái này, l逢w"ej医t có kh違 p<pi"mjw院ch tán c栄a ch医t khí

và hòa tan c栄a ch医t l臼ng

S詠 vjc{"8鰻i kh嘘k"n逢嬰ng riêng theo áp su医v<"f逢噂k"8k吋m t噂i h衣n, khi áp su医v"v<pi."mj "d鵜 nén l衣k."pi逢pi"v映 thành l臼ng H羽 th嘘ng t欝n t衣i hai pha cân b茨ng, pha l臼pi"pi逢pi"v映 và pha khí kh嘘k"n逢嬰ng riêng th医p Càng t噂k"8k吋m t噂i h衣n, kh嘘k"n逢嬰ng riêng c栄a khí tr荏 nên

l噂p"j挨p."pj逢pi"x磯n th医r"j挨p"uq"x噂i kh嘘k"n逢嬰ng riêng c栄a tr衣ng thái l臼ng T衣k"8k吋m t噂i

h衣n, không có s詠 khác nhau gi英a pha l臼ng và khí 雲 vt‒p"8k吋m t噂i h衣n, ch雨 m瓜t s詠 thay 8鰻i nh臼 v隠 áp su医t d磯n t噂i s詠 vjc{"8鰻i l噂n v隠 kh嘘k"n逢嬰ng riêng

Kh嘘k"n逢嬰pi"tk‒pi"x "8瓜 nh噂t c栄a dung môi siêu t噂i h衣n th医r"j挨p"uq"x噂i tr衣ng thái

l臼pi."pj逢pi"8瓜 khu院ch tán l衣k"ecq"j挨p"[21] S嘘 li羽w"8逢嬰c trình bày 荏 b違ng 1.2

B違ng 1.2: So sánh kh嘘k"n逢嬰pi"tk‒pi."8瓜 nh噂v."8瓜 phân tán gi英a ch医t khí, dung môi siêu

Dung môi siêu t噂i h衣n 100 Î 1000 50 Î 100 0,01 - 0,1

1.2.4.4 Trích ly bｊng kぶ thuｆt CO2 siêu tずi hＴn

CO2 8衣t tr衣ng thái siêu t噂i h衣p"mjk"8逢嬰e"8逢c"n‒p"pjk羽v"8瓜, áp su医v"ecq"j挨p"pjk羽v"8瓜

và áp su医t t噂i h衣p0"Ak吋m t噂i h衣n c栄a CO2 là Tc= 31oC, Pc = 73,8 bar

Trong t医t c違 các ch医t khí và ch医t l臼pi"8逢嬰c nghiên c泳u, dung môi CO2 8逢嬰c 泳ng

d映ng r瓜ng rãi nh医t trong trích ly siêu t噂i h衣n b荏i giá tr鵜 t噂i h衣n th医r."mj»pi"8瓜c h衣i, không b逸t l穎a, d宇 tìm và giá thành th医p CO2 siêu t噂i h衣n còn thích h嬰p trong trích ly các thành ph亥n không phân c詠e"pj逢"j{ftqectdqp."vtqpi"mjk"oqogpv"n逢叡ng c詠c c栄a nó

có th吋 hòa tan m瓜t s嘘 thành ph亥n phân c詠e"vtwpi"d·pj"pj逢"t逢嬰u, este, aldehyde và ceton [26] Hình 1.9 trình bày gi違p"8欝 pha c栄a CO2 siêu t噂i h衣n theo áp su医t và nhi羽v"8瓜

Hình 1.9: Gi違p"8欝 pha c栄a CO2

Nguyên t 逸c: Trích ly b茨ng dung môi siêu t噂i h衣n là m瓜t quá trình tách m瓜t hay nhi隠u

ch医t t瑛 m瓜t h厩n h嬰p, s穎 d映pi"n逢w"ej医t siêu t噂i h衣n làm dung môi trích ly H厩n h嬰p ban 8亥w"vj逢運ng 荏 d衣ng r逸p."pj逢pi"e pi"e„"mjk"荏 d衣ng l臼ng

⇒w"8kあm:

ろ Ho衣t ch医t vjw"8逢嬰c e„"8瓜 tinh khi院t cao;

ろ Hi羽u su医v"vt ej"x "8瓜 ch丑n l丑c cao;

ろ Dung môi s穎 d映ng thân thi羽n v噂k"o»k"vt逢運ng và d宇 dàng thu h欝i;

ろ Ho衣t tính sinh h丑c c栄a s違n ph育m ly vt ej"8逢嬰c b違o toàn

Pj⇔ぢe"8kあm:

ろ Ejk"rj "ecq"j挨p"x噂i e e"rj逢挨pi"rj r"vt‒p=

ろ M厩i lo衣k"n逢w"ej医v"e„"8i吋m t噂i h衣n khác nhau

D詠a trên nh英pi"逢w."pj逢嬰e"8k吋m c栄a t瑛pi"rj逢挨pi"rj r"荏 vt‒p."rj逢挨pi"rj r"vt ej"n{"

b茨ng dung môi CO2 siêu t噂i h衣n có nh英pi"逢w"th院."8逢嬰c nghiên c泳w"x "8逢嬰e"8隠 ngh鵜 s穎

d映ng trong nhi隠w"n pj"x詠c [27, 28]

1.2.4.5 Hう thぐng trích ly bｊng CO2 siêu tずi hＴn

Vjk院v"d鵜"vt ej"n{"ej pj"8逢嬰e"vj吋"jk羽p"pj逢"j·pj"3032c0"A欝pi"fwpi"o»k"8逢嬰e"d鰻"uwpi"

x q"d·pj"ejk院v"d茨pi"j羽"vj嘘pi"d挨o"8欝pi"fwpi"o»k0"èr"uw医v"x壱p"j pj"320222"ruk0"N逢w"n逢嬰pi"d挨o"e„"vj吋"8k隠w"ej雨pj"n‒p"8院p"32"oN1rj¿v"*v嘘k"8c"34"oN1rj¿v+"vj吋"jk羽p"荏"j·pj"1.10d0"D瓜"8k隠w"mjk吋p"xk"z穎"n#<"hk吋p"vj鵜"vt‒p"o p"j·pj"e違o"泳pi"ejq"vj医{ e e"vj»pi"u嘘"pjk羽v"8瓜"x " r"uw医v"x壱p"j pj0"J·pj"3032e"vj吋"jk羽p"o p"j·pj"8k隠w"mjk吋p"e栄c"vjk院v"d鵜"EQ2

uk‒w"v噂k"j衣p0"Mj "EQ2 8逢嬰e"n o"n衣pj"d茨pi"vjk院v"d鵜"n o"n衣pj0"Pjk羽v"8瓜"n o"xk羽e trong mjq違pi v瑛"-32"8院p"-40̇E0"N逢w"n逢嬰pi<":"N1rj¿v0"E»pi"uw医v"n o"n衣pj<"8:2"DVW1ik運0"J羽"vj嘘pi"n o"n衣pj"8逢嬰e"vj吋"jk羽p"荏"j·pj"3032d

vt ej"n{"52"rj¿v"ejq"j o"n逢嬰ng PS cao nh医t (684,10 ± 14,50 mg/L) [29]

P<o"4237."pijk‒p"e泳u c栄a Vt逢運ng A衣i h丑c Công nghi羽p Thành ph嘘 H欝 Chí Minh 8«"vk院n hành trích ly PS t瑛 n医m linh chi b茨pi"rj逢挨pi pháp có h厩 tr嬰 gp|{og"8吋 t嘘i 逢w hóa quy trình Thí nghi羽m 8逢嬰c ti院n hành theo thi院t k院 t鰻ng h嬰p trung tâm K院t qu違 nghiên

c泳u 8« ch雨 ra r茨ng rj逢挨pi pháp enzyme mang l衣i hi羽u su医t trích ly cao nh医t 4,37% so v噂i các rj逢挨pi pháp khác Bên c衣nh 8„ nhóm nghiên c泳u e pi 8« kh違o sát hi羽u qu違 trích ly khi k院t h嬰p c栄a c違 ba rj逢挨pi pháp h厩 tr嬰 là siêu âm, vi sóng và enzyme, cho th医y r茨ng

P<o"4237."pj„o"pijk‒p"e泳u thu瓜e"vt逢運pi"A衣i h丑c Nagoya, Nh壱v"8« ti院n hành thu

nh壱n d-glucan t瑛 n医m linh chi b茨pi"rj逢挨pi"rj r"p逢噂c nóng s穎 d映ng áp su医t cao 謂nh j逢荏ng c栄a các y院u t嘘 nhi羽v"8瓜, t嘘e"8瓜 dòng CO2 và t益 l羽 dung môi: nguyên li羽w"8院n hàm n逢嬰ng d-D-inwecp"8逢嬰c kh違o sát theo mô hình Box-Dgjpmgp0"Ai隠u ki羽n trích ly cho hàm n逢嬰ng d-glucan cao nh医t (64,9 ± 0,8 %) là t衣i nhi羽v"8瓜 trích ly 37:üE."n逢w"n逢嬰ng CO2 là 1,3 mL/phút và t益 l羽 dung môi: nguyên li羽u là 60 mL/g

Qua các nghiên c泳w"vtqpi"x "piq k"p逢噂e"8«"e„"pjk隠u công trình nghiên c泳u v隠 n医m nkpj"ejk"e pi"pj逢"e e"j嬰p ch医t có trong n医m Tuy nhiên, nghiên c泳u v隠 8k隠u ki羽n trích

ly b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n, t嘘k"逢w"jq "8k隠u ki羽p"vt ej"n{"x "8 pj"ik "jq衣t tính sinh

h丑c c栄a polysaccharide v磯p"ej逢c"e„ nhi隠u công b嘘0"Fq"8„."8隠 tài này nghiên c泳u trích

ly ho衣t ch医v"x "8逢c"tc"sw{"vt·pj"vt ej"n{"d茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n v噂i hi羽u su医t trích

- A逢c"tc"8k隠u ki羽n trích ly phù h嬰r"8吋 8衣v"8逢嬰e"j o"n逢嬰ng polysaccharide cao nh医t

- Kh鰯pi"8鵜nh ho衣t tính sinh h丑c c栄a s違n ph育m ly trích vj»pi"swc"8 pj"ik "jq衣t tính: kháng oxy hoá, 泳c ch院 t院 d q"wpi"vj逢."mj pi"mjw育n và 泳c ch院 enzyme c- glucosidase

Nじi dung

- N瓜i dung 1: A鵜nh danh n医m linh chi

- N瓜i dung 2: Trích ly polysaccharide t瑛 n医m linh chi b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n; 8欝ng th運i kh違o sát 違pj"j逢荏ng c栄a các thông s嘘 v壱n hành h羽 th嘘ng 8院p"j o"n逢嬰ng polysaccharide vjw"8逢嬰c Ti院p"j pj"8鵜pj"n逢嬰ng polysaccharide t鰻ng b茨ng UV-vis

- N瓜i dung 3: Phân tích c医u trúc nguyên li羽w"vt逢噂c và sau khi trích ly

- N瓜i dung 4: Th穎 nghi羽m ho衣t tính sinh h丑c c栄a ecq"vt ej"vj»pi"swc"8 pj"ik "mj違

p<pi"mj pi"qz{"jq , kháng khu育n và 泳c ch院 enzyme c- glucosidase

Rj⇔￢pi"rj r"pijk‒p"eとu

1.4.3.1 Aおnh danh nＸm linh chi bｊng rj⇔￢pi"rj r"ikＶi trình tば Sanger

Nguyên t 逸c: Rj逢挨pi pháp gi違i trình t詠 Sanger d詠a trên k悦 thu壱t ph鰻 bi院n là k院t thúc

chu厩i (chain-termination) b茨ng vi羽c s穎 d映ng các deoxypwengqvkfg"8«"d鵜 ch雨nh s穎a làm

m医t nhóm hydroxyl 荏 8亥w"5Ó"e栄a phân t穎 8逢運pi0"Pj„o"5Ó-QJ"8„pi"xck"vt "ejq"rjfir"

g逸n thêm m瓜t nucleotide m噂i vào chu厩i Enzymepolymerase xúc tác ph違n 泳ng g逸n các nucleotide (dNTP) vào m衣ej"8挨p"e栄c"FPC"8吋 kéo dài m衣ch 荏 v鵜 vt "5Ó- OH và d瑛ng l衣i

n院u g逸n các dideoxyribonucleotide (ddNTP) vào chu厩i Trong m瓜t ph違n 泳ng ch泳a c違 dNTP và ddNTP nên sau ph違n 泳ng t鰻ng h嬰r."j·pj"vj pj"e e"8q衣p"FPC"e„"8瓜 dài khác nhau do ddNTP g逸n ng磯u nhiên làm d瑛ng ph違n 泳ng D詠a vào s詠 sai khác v隠 8瓜 dài các 8q衣n DNA hi吋n th鵜 trên b違p"ign"ucw"8k羽p"fk"8吋 z e"8鵜nh trình t詠 trong gene

永ng d映ng: Phân tích trình t詠 gen

1.4.3.2 Rj⇔￢pi pháp khＶo sát sば Ｖpj"j⇔ぞng cてa các yｘu tぐ trích ly

a) KhＶo sát sば Ｖpj"j⇔ぞng cてa tなng yｘu tぐ

Nghiên c泳u này s胤 ti院n hành kh違o sát 4 y院u t嘘 có kh違 p<pi"違pj"8院n quá trình trích n{."8„"n "v益 l羽 ethanol: nguyên li羽u, nhi羽t 8瓜, th運i gian và áp su医t Kh違q"u v"8逢嬰c th詠c

hi羽p"vjgq"rj逢挨pi"rj r"nw¤p"rjk‒p"v瑛ng bi院n và m厩i y院u t嘘 8逢嬰c kh違o sát theo 5 m泳c

v噂i hàm m映e"vk‒w"n "j o"n逢嬰ng polysaccharide, m厩i m泳e"8逢嬰c th詠c hi羽n ba l亥n l医y giá

tr鵜 trung bình

Sau quá trình kh違o sát, các y院u t嘘 違pj"j逢荏ng nhi隠w"8院n j o"n逢嬰ng polysaccharide 8逢嬰c ch丑n l丑e"x "z e"8鵜nh kho違ng bi院n thiên c栄a các y院u t嘘 8吋 th詠c hi羽n kh違o sát 違nh j逢荏pi"8欝ng th運i

b) Ｕpj"j⇔ぞng 8げng thぜi cてa các yｘu tぐ

Sau khi l詠a ch丑n t雨 l羽 ethanol: nguyên li羽u và kho違ng bi院n thiên phù h嬰p, ti院n hành

kh違o sát 違pj"j逢荏pi"8欝ng th運i các y院u t嘘 áp su医t, nhi羽v"8瓜 và th運i gian b茨pi"rj逢挨pi"pháp b隠 m員v"8 r"泳ng (Response Surface Methodology Î RSM) Rj逢挨pi"rj r"TUO"dcq"

g欝o"e e"m "vjw壱t toán h丑c và th嘘pi"m‒"f́pi"8吋 kh違o sát m嘘i quan h羽 gi英a hàm m映c tiêu

và các y院u t嘘 違pj"j逢荏ng d詠a trên s詠 phù h嬰p c栄a mô hình thi院t k院 và d英 li羽u th詠c nghi羽m0"Rj逢挨pi"rj r"p {"8逢嬰c áp d映pi"ucw"mjk"8«"z e"8鵜nh các y院u t嘘 quan tr丑ng có

th吋 ki吋o"uq v"8逢嬰c và z e"8鵜nh giá tr鵜 các y院u t嘘 8吋 có k院t qu違 t嘘k"逢w0"Rj逢挨pi"rj r"TUO"

v噂k"逢w"8k吋m kh嘘k"n逢嬰ng thí nghi羽m ít, m丑i h羽 s嘘 h欝k"sw{"8逢嬰e"z e"8鵜pj"8瓜c l壱p v噂i nhau, v·o"e e"8k隠u ki羽n ti院n hành th臼c"o«p"e e"8員e"8k吋m c栄a quá trình và z e"8鵜pj"8逢嬰e"8k吋m

c詠c tr鵜 Pj逢挨pi"rj r"v·o"e詠c tr鵜 8逢嬰c phát tri吋n t瑛 th詠c nghi羽m mô ph臼ng, nhi羽m v映 là xây d詠ng mô hình tính toán th詠c nghi羽o."vjgq"8„"z e"8鵜nh b瓜 k院t h嬰p giá tr鵜 e e"8k隠u

髪 布 ̈辿棚谷®辿®棚®谷

津 沈猪珍猪賃

髪" 髪 布 ̈辿辿®辿態髪 橋"

樽 辿

(1.2)

vtqpi"8„: y là hàm m映c tiêu c栄a quá trình nghiên c泳u; bi là h羽 s嘘 h欝i quy b壱c m瓜t mô t違 違pj"j逢荏ng c栄a các nhân t嘘 xi lên hàm m映c tiêu; xi là y院u t嘘 違pj"j逢荏ng lên hàm m映c tiêu; bij là h羽 s嘘 h欝i quy b壱c m瓜t mô t違 違pj"j逢荏pi"8欝ng th運i c栄a hai nhân t嘘 xi, xj; bijk là

h羽 s嘘 h欝i quy b壱c m瓜t mô t違 違pj"j逢荏pi"8欝ng th運i c栄a ba nhân t嘘 xi, xj, xk; bii là h羽 s嘘

h欝i quy b壱c hai, mô t違 違pj"j逢荏ng b壱c hai c栄a nhân t嘘 xi lên k院t qu違 th詠c nghi羽m Trong lu壱p"x<p"này, tác gi違 s穎 d映ng rj逢挨pi"rj r"RSM theo mô hình Box Î Behnken

V·"8„"n "o瓜t thi院t k院 e„" v"8k吋m m磯u và ch雨 8 k"j臼i ba c医r"8瓜 cho m厩i y院u t嘘."vtqpi"8„."các thi院t l壱r"n "&"3."2."-3"pj逢"vt·pj"d {"荏 hình 1.11

Hình 1.11: Mô hình Box-Behnken c) Rj⇔￢pi"rj r"rj¤p"v ej"8おpj"n⇔ぢng polysaccharide bｊng quang phご hＸp thu phân

tぬ (UV-Vis)

Rj逢挨pi"rj r"f詠c"vt‒p"8鵜nh lu壱t Lambert Î Beer M厩i ch医v"8隠u có m瓜v"d逢噂c sóng h医p thu c詠e"8衣k"8員e"vt逢pi0"A瓜 h医p thu tia sáng ph映 thu瓜c vào n欝pi"8瓜 c栄a ch医t nghiên c泳u trong dung d鵜ch T瑛 8„."e„"vj吋 z e"8鵜pj"8逢嬰c n欝pi"8瓜 ch医t trong dung d鵜ch [32, 33] U挨"8欝 nguyên lý máy UVÎXku"8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 hình 1.12

Hình 1.12: U挨"8欝 piw{‒p"n#"o {"8q"rj鰻 UVÎVis 1.4.3.3 Rj⇔￢pi"rj r"rj¤p"v ej"eＸu trúc nguyên liうw"vt⇔ずc và sau khi trích ly

S穎 d映ng kính hi吋n xk"8k羽n t穎 quét (Scan Electron Microscopy Î SEM) 8吋 phân tích

c医u trúc nguyên li羽u Kính hi吋p"xk"8k羽n t穎 quét là m瓜t lo衣i kính hi吋p"xk"8k羽n t穎 có th吋 t衣o

ra 違nh v噂k"8瓜 phân gi違i cao c栄a b隠 m員t m磯u v壱t b茨ng cách s穎 d映ng m瓜v"ej́o"8k羽n t穎 (chùm các electron) h姻p quét trên b隠 m員t m磯u Vi羽c t衣o 違nh c栄a m磯u v壱v"8逢嬰c th詠c hi羽n thông qua vi羽c ghi nh壱n và phân tích các b泳c x衣 phát ra t瑛 v逢挨pi"v e"e栄c"ej́o"8k羽n t穎

v噂i b隠 m員t m磯u v壱t Các tín hi羽w"8k羽n t穎 v逢挨pi"v e"x噂i b隠 m員t m磯u, c医u trúc thành ph亥n

và c医u trúc tinh th吋 C医u t衣o thi院t b鵜 UGO"8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 hình 1.13

永ng d映ng: Cung c医p hình thái b隠 m員t nguyên li羽w"vt逢噂c và sau khi trích

Hình 1.13: C医u t衣o thi院t b鵜 SEM

1.4.3.4 Rj⇔￢pi"rj r"thぬ nghiうm hoＴt tính sinh hがc

a) HoＴt tính kháng oxy hoá

Rj⇔￢pi"rj r"dｈt gぐc tば do DPPH

Nguyên t 逸c: Rj逢挨pi"rj r"f詠a trên kh違 p<pi"rj違n 泳ng v噂i các ch医t có nguyên t穎

j{ftqigp"nkpj"8瓜ng c栄a DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, C18H12N5O6) DPPH là

m瓜t g嘘c t詠 do nhân t衣o, 鰻p"8鵜pj."e„"o w"v o."8瓜 h医p thu c詠e"8衣i 荏 d逢噂c sóng 517 nm và

có th吋 tham gia ph違n 泳ng v噂i các ch医t có kh違 p<pi"ejq"piw{‒p"v穎 hydro, sau ph違n 泳ng

s胤 làm gi違o"e逢運pi"8瓜 màu tím c栄a dung d鵜ch và chuy吋n sang màu vàng T瑛 8„."e„"vj吋

8 pj"ik "mj違 p<pi"mj pi"qz{"j„c"vj»pi"swc"xk羽e"8q"8瓜 h医p thu c栄a dung d鵜ch màu 荏 d逢噂c sóng 517 nm [34] E挨"ej院 ph違n 泳ng trung hòa g嘘c t詠 fq"FRRJ"8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 hình 1.14

Hình 1.14: Ph違n 泳ng m医t màu c栄a DPPH v噂i ch医t kháng oxy hoá

Giá tr鵜 IC50 c栄a c違 axit ascorbic và d鵜ch chi院v"8逢嬰c tính toán t瑛 mô hình h欝i quy và

ph亥p"vt<o"d逸t g嘘e"FRRJ"8逢嬰c tính b茨ng công th泳c 1.3

vtqpi"8„<"経 *oo+"n "8逢運ng kính vòng kháng khu育n và"穴 *oo+"n "8逢運ng kính khoanh

gi医y kháng sinh

V隠 rj逢挨pi"rj r"vj穎 nghi羽m ho衣t tính này, t衣i Vi羽v"Pco"e pi"pj逢"vt‒p"vj院 gi噂i vj逢運ng áp d映ng các th穎 nghi羽m có dùng enzyme 8吋 8 pj"ik "mj違 p<pi"泳c ch院 enzyme g-glucosidase ho員c enzyme g-amylase c栄a cao trích, thu嘘c nghiên c泳u và không dùng enzyme [36] Trong lu壱p"x<p"p {."rjfir"vj穎 ho衣t tính 泳c ch院 enzyme g-inwequkfcug"8逢嬰c

th詠c hi羽p"8吋 th穎 nghi羽m kh違 p<pi"mj pi"vk吋w"8逢運ng c栄a cao trích

Nguyên t 逸c: Ph違n 泳ng th栄y phân ch医t n隠n p-pkvtqrjgp{n"g-D-glucopyranoside

(p-NPG) khi có m員t enzyme g-glucosidase s胤 t衣o ra s違n ph育m p-nitrophenol (p-PR+"x D-inwequg"e„"rj逢挨pi"vt·pj"j„c"j丑e"8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 hình 1.16 Khi có m員t ch医t 泳c ch院, enzyme g-glucosidase s胤 gi違m m瓜t ph亥n ho衣v"v pj"p‒p"n逢嬰ng p-pkvtqrjgpqn"ukpj"tc" v"j挨p"

"g-d磯p"8院n vi羽c gi違o"8瓜 h医p thu t衣k"d逢噂c sóng 410 nm [37]

Hình 1.15: Nguyên t逸c th穎 nghi羽m ho衣t tính kháng ti吋w"8逢運ng

A pj"ik "jq衣t tính kháng ti吋w"8逢運ng c栄a cao trích n医m linh chi (ガ+鐸O) thông qua

ph亥p"vt<o"泳c ch院 enzyme g-glucosidase theo công th泳c (1.5):

vtqpi"8„"1&托"và 1&O大"l亥p"n逢嬰v"n "8瓜 h医p thu quang c栄a cao trích và m磯w"8嘘i ch泳ng Giá tr鵜 IC50 8逢嬰e"z e"8鵜nh d詠a trên kh違 p<pi"泳c ch院 50% ho衣v"8瓜ng c栄a enzyme g-glucosidase Giá tr鵜 này càng nh臼 ch泳ng t臼 cao trích có ho衣t tính càng cao

Tính mずi cてa luｆp"x<p

N医m linh chi là lo衣k"f逢嬰c li羽w"8逢嬰c nghiên c泳u khá nhi隠u t衣i Vi羽v"Pco"e pi"pj逢"trên th院 gi噂i Tuy nhiên, vi羽c nghiên c泳w"8k隠u ki羽n trích ly GPLs b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu

t噂i h衣n v磯n còn khá ít Bên c衣pj"8„."xk羽c áp d映ng quy ho衣ch th詠c nghi羽o"8吋 v·o"tc"8k隠u

ki羽p"vt ej"n{"ejq"j o"n逢嬰ng GPLs cao nh医t v磯p"e p"n "j逢噂ng nghiên c泳u m噂i Thêm vào 8„, áp d映ng rj逢挨pi"rj r"rj¤p"v ej"jk羽p"8衣i pj逢"m pj"jk吋p"xk"8k羽n t穎 8k羽n t穎 swfiv"8吋

8 pj"ik "e医u trúc b隠 m員t n医o"vt逢噂c và sau trích ly b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣n Ngoài tc."8 pj"ik "e e"jq衣t tính sinh h丑e"pj逢"mj pi"qz{"jq "x "mj pi"mjw育n góp ph亥n kh鰯ng 8鵜nh giá tr鵜 f逢嬰c li羽u c栄a n医m linh chi

A„pi"i„r"eてa luｆp"x<p

V噂i s詠 ikc"v<pi"x隠 b羽nh t壱t và ô nhi宇o"o»k"vt逢運ng, eqp"pi逢運k"8cpi"8嘘i m員c v噂i nhi隠w"piw{"e挨"違pj"j逢荏ng 8院n s泳c kho飲 Vi羽c s穎 d映ng các ho衣t ch医t có ho衣t tính sinh

h丑c t瑛 th違q"f逢嬰e."8員c bi羽t là n医m linh chi 8逢嬰c chú tr丑ng Trích ly polysaccharide t瑛

n医m linh chi b茨ng k悦 thu壱t CO2 siêu t噂i h衣p"n "rj逢挨pi"rj r"jk羽u qu違 và v"8瓜c h衣i góp

ph亥n làm gi違m ô nhi宇m môi vt逢運ng Ngu欝n CO2 r医t d欝i dào và phù h嬰r"8吋 làm dung o»k"ejq"sw "vt·pj"vt ej"n{0"A欝ng th運i, cao chi院v"e„"j o"n逢嬰ng ho衣t ch医t cao s胤 m荏 ra j逢噂ng 泳ng d映ng m噂i trong y h丑e."f逢嬰c ph育m và m悦 ph育m

hóa h 丑c Tr 衣ng thái A員c tính Ngu 欝n g嘘c

1 Axit ascorbic C6H8O6 R逸n 99,7 % Trung Qu嘘c

su医t v壱n hành 10,000 psi (~690 dct+."n逢w"n逢嬰pi"d挨o"622"

mL/phút

Cân phân tích 4 s嘘 CPA225D

c栄a hãng Satorius-A泳c

Thí nghi 羽m

Aおnh danh nＸm linh chi

DNA t鰻ng s嘘 c栄a m磯u n医o"8逢嬰c tách chi院t b茨pi"rj逢挨pi"rj r"Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) Ph違n 泳pi"RET"8逢嬰c s穎 d映pi"8吋 khu院ej"8衣i DNA t鰻ng s嘘 b茨ng thi院t b鵜 Crrnkgf" Dkqu{uvgouª" 4942" f詠a trên vi羽c s穎 d映ng kh違 p<pi" e栄a enzyme DNA rqn{ogtcug"8吋 t鰻ng h嬰p chu厩i ADN m噂i t瑛 chu厩k"CFP"dcp"8亥w"8逢嬰c cung c医p Chu trình nhi羽t ph違n 泳ng PCR g欝m 95oC trong 3 phút, 35 chu kì 荏 95oC trong 1 phút, 60oC trong 30 giây, 72oC trong 1 phút và k院t thúc 荏 72oC trong 5 phút K院t qu違 RET"8逢嬰c

ki吋m tra b茨pi"e ej"8k羽n di trên gel agarose 1,5%, hi羽w"8k羽n th院 80V, 250mA, trong 40 phút

A鵜c"8k吋m g穎i m磯u: Vi羽n Nghiên c泳u Sinh h丑e"x "O»k"vt逢運pi."vt逢運pi"A衣i h丑c Nông

N¤o"Vr0JEO."rj逢運ng Linh Trung, Tp.Th栄 A泳c, Tp.HCM

KhＶo sát sば Ｖpj"j⇔ぞng cてa các yｘu tぐ 8ｘp"j o"n⇔ぢng polysaccharide

2.2.2.1 Quy trình trích ly polysaccharide

Quy trình trích ly polysaccharide t瑛 n医m linh chi 8逢嬰c th吋 hi羽n 荏 hình 2.1

Hình 2.1: Quy trình trích ly polysacchride t瑛 n医m linh chi

Thuy 院t minh quy trình: Sw "vt·pj"vt ej"n{"8逢嬰c th詠c hi羽n b茨ng h羽 th嘘ng CO2 siêu

t噂i h衣p"*Urg"挑"gf"UHG"oqfgn"9292."Crrnkgf"Ugrcigu."WUC+0"7"i"o磯w"8逢嬰c thêm 嘘ng trích 50 mL (嘘pi"vt ej"8逢嬰c làm b茨ng thép không g雨 và có th吋 ch鵜w"8逢嬰c áp su医t t嘘k"8c"

là 10.000 psi (690 bar) và 240 °C Các vòng tròn b茨pi"ecq"uw"x "rqn{rtqr{ngpg"8逢嬰c

l逸r"x q"jck"8亥u c栄a 嘘pi"vt ej"8吋 pi<p"piw{‒p"nk羽u n医m b鵜 t "t 0"Vt逢噂c khi ti院n hành quá trình trích ly, 嘘pi"vt ej"8逢嬰e"8k隠u ch雨nh áp su医t và nhi羽v"8瓜 8吋 CO2 8衣t tr衣ng thái siêu

t噂i h衣n Quá trình chi院v"8逢嬰c th詠c hi羽n 荏 các nhi羽v"8瓜, áp su医t, t益 l羽 dung môi:nguyên

li羽u và th運i gian khác nhau T嘘e"8瓜 dòng CO2 x "gvcpqn"8逢嬰c s穎 d映ng trong các thí nghi羽o"8逢嬰c c嘘 mj»pi"8鰻i 荏 2 L/phút Sau th運i quá trình trích ly, khí CO28逢嬰c lo衣i b臼

b茨ng cách gi違m áp su医t D鵜ch l丑e"8逢嬰e"e»"swc{"ej¤p"mj»pi"8吋 lo衣i b臼 fwpi"o»k."8院n khi còn 1/3 dung d鵜ch cho thêm ethanol vjw"8逢嬰c k院t t栄a K院t t栄c"8逢嬰c r穎a 3 l亥n v噂i ethanol0"Ago"u医{"mj»"vjw"8逢嬰c polysaccharide thô

2.2.2.2 KhＶo sát Ｖpj"j⇔ぞng cてa tなng yｘu tぐ 8ｘp"j o"n⇔ぢng polysaccharide

Lu壱p"x<p s胤 kh違o sát b嘘n y院u t嘘 có kh違 p<pi"違pj"j逢荏pi"8院n j o"n逢嬰ng GPLs 8„"n "

t益 l羽 ethanol: nguyên li羽u, nhi羽v"8瓜, th運i gian và áp su医t M厩i y院u t嘘 8逢嬰c kh違o sát theo

6 m泳c v噂i m厩i thí nghi羽o"8逢嬰c l員p l衣i 3 l亥n, l医y giá tr鵜 trung bình Vùng kh違q"u v"8逢嬰c

a) Ｕpj"j⇔ぞng cてa tぴ lう ethanol: nguyên liうu

Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a t益 l羽 ethanol: nguyên li羽u 8院n j o"n逢嬰ng GPLs Quy vt·pj"vt ej"n{"8逢嬰c th詠c hi羽n pj逢 trình bày 荏 hình 2.10"Vjgq"8„."c嘘 8鵜nh các y院u t嘘 th運i gian, nhi羽v"8瓜 và t益 l羽 ethanol: nguyên li羽u; vjc{"8鰻i áp su医v"pj逢"vt·pj"d {"荏 b違ng 2.4

B違ng 2.4: Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a t益 l羽 ethanol: nguyên li羽u

T 益 l羽 ethanol: nguyên li羽u (mL/g) 5 10 15 20 25 30

b) Ｕpj"j⇔ぞng cてa nhiうv"8じ

Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a nhi羽v"8瓜 8院p"j o"n逢嬰ng GPLs0"Sw{"vt·pj"vt ej"n{"8逢嬰c

th詠c hi羽n pj逢 trình bày 荏 hình 2.10"Vjgq"8„."th運i gian và áp su医t 8逢嬰c c嘘 8鵜nh, t益 l羽 ethanol: nguyên li羽u phù h嬰p 8逢嬰c tìm ra 荏 m映c a), nhi羽v"8瓜 8逢嬰e"vjc{"8鰻k"pj逢"vt·pj"d {"

荏 b違ng 2.5

B違ng 2.5: Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a nhi羽v"8瓜

T 益 l羽 ethanol: nguyên li羽u (mL/g) Thích h嬰p 荏 m映c a)

c) Ｕpj"j⇔ぞng cてa thぜi gian

Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a th運i gian vt ej"n{"8院p"j o"n逢嬰ng GPLs Quy trình trích n{"8逢嬰c th詠c hi羽p"pj逢"hình 2.10"Vjgq"8„."e嘘 8鵜nh áp su医t, t益 l羽 ethanol: nguyên li羽u và nhi羽v"8瓜 thích h嬰r"8逢嬰e"8逢嬰c tìm ra 荏 m映c a) và b), thay 8鰻i th運i gian vt ej"n{"pj逢"vt·pj"bày 荏 b違ng 2.6

B違ng 2.6: Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a th運i gian trích ly

T 益 l羽 ethanol: nguyên li羽u (mL/g) Thích h嬰p 荏 m映c a)

B違ng 2.7: Kh違o sát s詠 違pj"j逢荏ng c栄a áp su医t

Áp su 医t (bar) 250 300 350 400 450 500

T 益 l羽 ethanol: nguyên li羽u (mL/g) Thích h嬰p 荏 m映c a)

Nhi 羽v"8瓜 ( o C) Thích h嬰p 荏 m映c b)

2.2.2.3 KhＶo sát Ｖpj"j⇔ぞpi"8げng thぜi các yｘu tぐ 8ｘp"j o"n⇔ぢng polysaccharide

Sw{"vt·pj"vt ej"n{"8逢嬰c th詠c hi羽p"pj逢"hình 2.1, ti院p"j pj"rj¤p"v ej"x "z e"8鵜nh các

y院u t嘘 違pj"j逢荏ng m衣pj"8院p"j o"n逢嬰ng GPLs theo mô hình Box Î Behnken g欝m 29 thí