BÁO cáo THÍ NGHIỆM hóa SINH tên bài ĐỊNH TÍNH KHẢO sát GLUCIDE

Khi đó, dung dịch sẽ cho kết tủa màu đỏ vì Cu2+ bị khử thành Cu1+ - Trong dung dịch Fehling gồm có Fehling A và Fehling B: + Fehling A chứa CuSO4 + Fehling B chứa hỗn hợp NaOH và muối Ka

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG – Bm Công nghệ Sinh học

o_oOo_o

BÁO CÁO THÍ NGHIỆM HÓA SINH

GVBM: Lê Văn Bình

Nhóm 2

Bài số: 2 Tên bài: ĐỊNH TÍNH & KHẢO SÁT GLUCIDE

Ngày thí nghiệm: 25/08/2018

ĐIỂM

I Xác định tính khử của đường đơn bằng phản ứng Fehling

1 Nguyên tắc:

- Vì trong phân tử monosaccrit như glucose, fructose có các nhóm chức –CHO,-C=O mang tính khử nên ta sử dụng các chất chứa ion kim loại như Cu, Fe để xác định tính khử của chúng

- Sử dụng hỗn hợp Fehling để xác định tính khử của đường đơn Khi đó, dung dịch sẽ cho kết tủa màu đỏ vì Cu2+ bị khử thành Cu1+

- Trong dung dịch Fehling gồm có Fehling A và Fehling B:

+ Fehling A chứa CuSO4

+ Fehling B chứa hỗn hợp NaOH và muối Kali natri tartrate

Đây là phương pháp tạo ra dung dịch Fehling, từ đó chúng ta có được

Cu2+ trong phức hợp màu xanh

Khi đun hỗn hợp có Cu2+ với chất có tính khử mạnh như monosaccarit thì sẽ xuất hiện tủa màu đỏ

Dưới đây là phương trình rút gọn cho cả quá trình:

2 Các bước tiến hành:

Ống

nghiệm

Glucose 1%

Fructose 1%

Fehling A Fehling B Gia nhiệt

xuất hiện kết tủa

3 Kết quả thí nghiệm:

Cả 2 ống nghiệm đều xuất hiện kết tủa đỏ gạch ở đáy ống nghiệm nhưng ống

nghiệm chứa fructose đậm màu hơn ống nghiệm chứa glucose

Dung dịch trước khi đun cách thủy

Dung dịch sau khi đun cách thủy (Ống nghiệm bên trái chứa Glucose, Ống nghiệm bên phải chứa Fructose)

4 Giải thích và so sánh với lý thuyết:

Thuốc thử Fehling A là dd CuSO4 và Fehling B là dd muối natri kali tartrat Có thể thấy muối phức trên là hợp chất không bền nên khi cho chúng tác dụng với nhau ta sẽ thu được ion Cu2+

Kết tủa đỏ gạch ở đáy ống nghiệm là kết quả của phản ứng giữa nhóm chức – CHO và –CO với Cu2+ trong dung dịch Fehling cho ra sản phẩm là Cu2O Nhưng ống nghiệm số 2 có kết tủa đậm hơn vì tính khử của fructose mạnh hơn glucose

II Xác định tính khử của đường đôi bằng phản ứng

Fehling

1 Nguyên tắc

Disaccarit là phân tử đường đôi được tạo nên từ 2 phân tử đường đơn monosaccarit Ta sử dụng dung dịch Fehling để xác định tính khử của disaccarit nhờ vào sự liên kết của nhóm OH glucozit của monosaccarit thứ 1 với nhóm OH ancol của monosaccarit thứ 2

2 Cách tiến hành:

Ống

nghiệm

Maltose 2%

Lactose 2%

Saccarose 2%

Fehling

A

Fehling

B

Gia nhiệt Hiện tượng

Đun cách thủy

Có kết tủa

Không kết tủa,dung dịch vẫn ở trạng thái trong suốt

3 Kết quả:

Ở cả ống 1 và ống 2 đều thấy xuất hiện kết tủa sau 1 khoảng thời gian

đun Sau khi thấy kết tủa ở ống 1 và 2 thì đun thêm 1 thời gian ngắn

ống 3 vẫn không thấy xuất hiện kết tủa

Dung dịch trước khi đun cách thủy

Dung dịch sau khi đun cách thủy ( Từ trái qua phải, ống nghiệm 1 là Maltose, ống nghiệm 2 là Lactose,

ống nghiệm 3 là Saccarose)

4 Nhận xét và so sánh với lý thuyết

Có thể nhận thấy khi các đường đôi như maltose và lactose có nhóm

OH glucozit(monosaccarit 1) liên kết với nhóm OH

alcol(monosaccarit 2) thì vẫn còn để lại nhóm andehit tự do của 1 trong 2 phân tử đường còn lại

Ở đường saccarose có liên kết 1-2 glucozit, vì thế các nhóm andehit tự

do bị khóa lại Khi không còn nhóm OH hemiaxetal tự do thì không chuyển được thành dạng mạch hở chứa anđehit và làm đường

saccarose mất tính khử

III Chiết xuất glycogen

1 Nguyên tắc

Chiết xuất glycogen từ gan động vật bằng cách lọc hết các chất còn lại

có trong gan như protein,lipit,…

Sử dụng các dung dịch kiềm,cồn và nước để tiến hành chiết xuất

2 Cách tiến hành:

B1:5g gan tươi( nghiền sẵn)+20ml KOH 30% đã đun nóng B2:Cho vào cốc thủy

tinh Đun và khuấy liên

tục đến khi gan tan hết

B3:Để nguội, thêm 2ml

Na 2 SO 4 10% + 50ml cồn 96%

B7:Thu tủa, đem sấy khô

B6:Khuấy cho dung dịch hòa tan sau đó để lắng, gạn bỏ phần dịch bên trên

B5:Hòa vào dung dịch 1-2ml nước cất+ 20ml cồn 96 0 B4:Khuấy đều để các chất

tác dụng nhanh hơn và hình thành tủa Để tủa lắng và gạt bỏ nước,thu

tủa

3 lần

3 Kết quả

Thu được 1 khối lượng kết tủa rắn màu vàng sau khi sấy khô chính là glycogen đã đuợc chiết xuất

Dung dịch gan tươi đã đun nóng

Dung dịch sau khi để nguội, thêm 2ml Na2SO4 10% + 50ml cồn 96%

Glycogen đã được chiết xuất

4 Các lưu ý và bài học rút ra:

a)Tại sao không sử dụng HCl thay vì KOH ở bước 1, KOH có tác dụng gì ?

Trả lời: Chúng ta sử dụng KOH ở bước này để tạo môi trường kiềm mạnh nhằm phá hủy mô gan, thứ chúng ta không cần trong thí nghiệm này Không sử dụng HCl trong trường hợp là vì HCl là acid mạnh, nó không những phá hủy mô gan mà còn phá hủy cả glycogen, thứ chúng

ta cần chiết xuất

b) Tại sao lại cần sử dụng muối Na2SO4 và cồn ở bước 3 ?

Trả lời:

c) Tại sao phải lặp lại bước 5 đến 3 lần ? Công dụng của nước và cồn trong thí nghiệm này là gì ?

IV Thủy phân tinh bột

1 Nguyên tắc:

Sử dụng acid và nhiệt độ để phân giải tinh bột Từ đó tính toán thời gian phân giải và các sản phẩm có thể có qua các giai đoạn phân giải Sản phẩm cuối cùng khi phân giải hoàn toàn tinh bột là maltose và glucose Việc sử dụng iod trong thí nghiệm này dùng để xác định các

- Bước 1: Cho vào cốc thủy tinh 10ml tinh bột 1% và 5ml HCl 10%,

- Bước 2: Đun cách thủy khoảng 7- 10 phút, đậy nắp miệng cốc( Chú ý: Khi đun có thể có khí HCl rất độc thoát ra, vì thế nên cẩn thận khi đun)

Phần 2: Kiểm tra dịch thủy phân để xem đã phân giải tinh bột đến giai đoạn nào

Ống

nghiệm

Dịch thủy phân

Dung dịch

I2/KI

Fehling

A

Fehling

B

Gia nhiệt

cách thủy

3 Kết quả:

Ở ống 1 ta thấy xuất hiện dung dịch màu vàng nhạt

Ở ống 2 sau khi đun 1 phút 15s, ta thấy xuất hiện kết tủa đỏ gạch,sau khi đun thêm 1 thời gian kết tủa vẫn giữ nguyên

Tinh bột sau khi được thủy phân

Ống nghiệm bên trái chứa dịch thủy phân và Fehling A+B, ống

nghiệm bên phải chứa dịch thủy phân và I2/KI

Dung dịch sau khi đun ống nghiệm chứa dịch thủy phân và Fehling

A+B (bên phải)

4 Nhận xét và so sánh với lý thuyết

Ở đây chúng ta có thể kết luận màu vàng nhạt ở ống 1 là màu của dung dịch iod do tinh bột đã phân giải hoàn toàn Có thể khẳng định điều đó là do ở ống 2, lượng dịch thủy phân tác dụng với thuốc thử

không nên vội kết luận rằng tinh bột đã bị phân hủy hoàn toàn, cần phải thử thêm xem ống nghiệm thứ 2 đã có kêt tủa đỏ gạch hay chưa Nếu chưa rất có thể tinh bột vẫn còn đang ở dạng trung gian do sản phẩm trung gian dextrin tác dụng với dung dịch iod vẫn có thể cho ra màu vàng nhạt như trên

Thứ tự các sản phẩm xuất hiện khi phân giải tinh bột:

 Amylodextrin

 Erythrodextrin

 Achrodextrin

 Malto dexttrin

 Maltose và glucose