CHƯƠNG XIII CÔNG NGHỆ GIÁM SÁT VI SINH VẬT VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG MÔI TRƯỜNG... Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật ở mức phân tử Kỹ thuật PCR Kỹ thuật kiểm tra enzyme vi sinh vật Kỹ th
Trang 1CHƯƠNG XIII CÔNG NGHỆ GIÁM SÁT VI SINH VẬT VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG MÔI TRƯỜNG
Trang 2 Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật ở mức phân tử
Kỹ thuật PCR
Kỹ thuật kiểm tra enzyme vi sinh vật
Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật ở mức tế bào
Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật phát quang
Kỹ thuật kiểm tra vi khuẩn đánh giá chất lượng nước
Trang 3Nguyên tắc
Dựa trên sự khuếch đại một trình tự gene đích
Trang 5 Nguyên lý của real-time PCR
Real-time PCR là một phương pháp pcr mới
nó kiểm soát lượng huỳnh quang giải phóng ra trong phản ứng từ đó có thể biết được lượng sản phẩm PCR trong từng thời điểm (chu kỳ) của quá trình khuếch đại, trái ngược vơí PCR truyền thống chỉ biết được lượng sản phẩm được khuếch đại ở thời điểm cuối cùng của phản ứng khuếch đại
Trang 8 Dựa trên nguyên tắc kháng thể - kháng nguyên
Trang 10Nguyên tắc:
Dựa vào sự phát hiện ATP thông qua enzyme luciferase sự phát sáng
Trang 15- Phát hiện nhanh
- Nhạy vì có thể phát hiện 1 pg ATP tương ứng với
1000 tế bào vi khuẩn
Trang 16 Dễ bị dương tính giả
Chi phí cao
Trang 17 Kỹ thuật MPN
Kỹ thuật màng lọc
Trang 18- Viết tắt: Most Probably Number
- Dựa trên nguyên tắc pha loãng tới hạn
Trang 19 Mẫu được pha thành một dãy thập phân liên tiếp
và mẫu được đưa vào môi trường thích hợp
Ủ và đọc số ống dương tính
Tra bảng Mac – crady tính toán số lượng
Trang 20MẪU PHA LOÃNG
LSBBGBL
EC broth EMB IMViC
Coliforms
37 0 C/24h
Coliform chịu nhiệt
E.Coli
Trang 21-10 -1
10 -2
10 -3
2 1 1
Tra bảng
37 0 C/24h
Trang 22-10 -1
10 -2
10 -3
Tra bảng
Trang 23-10 -1
10 -2
10 -3
Trang 24-10 -1
10 -2
10 -3
Trang 25- Sử dụng để định lượng VSV trong các mẫu lỏng như nước sinh hoạt, nước thải, sữa …
- Sử dụng màng lọc vô trùng có kích thước nhỏ (0,27 m và 0,45 m)
Trang 26Có 2 loại:
Trang 28Một số thao tác khi sử dụng bộ lọ
c vi sinh